本发明公开了一种内生真菌巴西类壳小圆孢菌株及其应用,该菌株能够在液体发酵的情况下生产川芎哚,属首次发现真菌可生产川芎哚。该菌株于2016年5月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉大学),保藏编号为:CCTCC M 2016279。本发明还公开了一种应用所述的保藏菌株制备川芎哚的方法,包括以下步骤:菌体的培养及发酵;次级代谢产物的提取;柱层析纯化。本发明为利用微生物发酵生产川芎哚提供了新的菌种,通过该菌株发酵生产川芎哚的周期短,成本低,其摇瓶发酵的川芎哚的产量可达606.3μg/L。本发明提供的新菌株,为应用于工业化大规模生产的优良菌株的选育提供了良好的研究基础,应用前景广阔。