本发明涉及一种无诱导剂添加高产D‑泛酸的基因工程菌、构建方法及应用。本发明主要通过精细下调支链氨基酸代谢途径的关键基因ilvE、leuA，使工程菌在满足自身生长需求的同时解除支链氨基酸合成对D‑泛酸合成的抑制作用；敲除lacI基因使得工程菌在生产过程中不需要添加诱导剂IPTG，得到一株无诱导剂IPTG添加用于高产D‑泛酸的工程菌株，并对发酵培养基的组分、发酵工艺进行了优化，最终使得D‑泛酸摇瓶效价达到7.23 g/L；运用5‑L发酵罐发酵48~60小时，D‑泛酸产量能够达到90~105 g/L，发酵周期较出发菌株缩短35%~48%，发酵过程中无需添加诱导剂IPTG及其他氨基酸，减少了发酵步骤。
📄 2025103157262
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2025-03-18
本发明公开了一种可递呈多个异源肽或蛋白质的细菌外膜囊泡及其构建方法和应用。细菌外膜囊泡的膜表面和囊泡内腔均同时负载有多个异源肽或蛋白质，锚定在细菌外膜囊泡表面的异源肽或蛋白质是通过linker融合细菌膜蛋白表达展示在外膜囊泡表面，负载在细菌外膜囊泡的囊泡内腔的异源肽或蛋白质是通过融合跨细菌内膜的蛋白信号肽或蛋白截短体表达从而负载在外膜囊泡内腔，通过对革兰氏阴性菌进行相关基因敲除，实现可递呈异源肽或蛋白质的细菌外膜囊泡的高效生产，本发明拓展了外膜囊泡负载异源肽或蛋白质数量、种类的限制以及外膜囊泡作为多抗原疫苗载体的使用范围，重组革兰氏阴性菌能高效生产负载多个异源肽或蛋白质的外膜囊泡。
📄 2022102805480
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2022-03-22
本发明公开了一种群体感应型大肠杆菌自裂解系统及其应用，所述大肠杆菌自裂解系统包括裂解蛋白编码基因、AHLs合成酶编码基因luxI、转录调节因子编码基因luxR及含LuxR‑AHLs复合物结合区域的luxI启动子PluxI序列；所述裂解蛋白编码基因由启动子PluxI调控。本发明中的细胞自裂解系统无需额外添加诱导剂，且无需人为监督，可以在大肠杆菌达到特定的生物量时启动裂解，从而释放胞内所表达的重组蛋白，对重组蛋白的损耗小，且可以持续性释放重组蛋白。本发明构建的不同强度的yasI启动子突变体调控裂解蛋白的表达，可以为不同重组蛋白的生产提供选择。
📄 2022112077723
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2022-09-30
本发明公开了一种质粒pRC12及其在微生物降解卤代烃污染物中的应用，质粒pRC12核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。所述应用是将含质粒pRC12的基因工程菌接种至含卤代烃污染物的无机盐培养基中，在28～32℃、pH6.8～7.2下进行降解，实现对卤代烃污染物的降解；本发明质粒pRC12可大幅度提高氯酚类有机污染物的处理能力，卤代氯酚类有机污染物的生物降解效率提高分别为：一氯酚(MCP)56.12％、二氯酚(DCP)55.09％、三氯酚(TCP)54.88％、五氯酚(PCP)47.35％。
📄 2018116319265
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2018-12-29
本发明涉及一种重组大肠杆菌，以大肠杆菌W3110为宿主细胞，通过代谢工程改造提高络缌关键前体L‑Phe，再过表达来源于粘红酵母的苯丙氨酸解氨酶(RgPAL)、链霉菌的肉桂酰CoA连接酶(Sc4CL)、拟南芥的肉桂酰CoA还原酶(AtCCR)和糖苷转移酶(AtUGT73C5)，实现了络缌(Rosin)的从头合成，该菌株在5L发酵罐分批补料发酵后，产量为4.01g/L，是目前报道的最高产量。
📄 202210729498X
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2022-06-24
本发明公开了一种用于重组表达棘白菌素B脱酰基酶的表达盒及应用，所述表达盒包括依次连接的启动子核酸序列、RBS核酸序列、编码OmpA信号肽的核酸序列、编码第一促溶肽的核酸序列、编码棘白菌素B脱酰基酶α亚基的核酸序列、第一终止密码子、RBS核酸序列、编码OmpA信号肽的核酸序列、编码棘白菌素B脱酰基酶β亚基的核酸序列、编码第二促溶肽的核酸序列、第二终止密码子，其中，第一促溶肽的氨基酸序列为：GEGEG；第二促溶肽的氨基酸序列为：KKKKKK。本发明表达盒能够用于表达获得棘白菌素B脱酰基酶，通过两种特定序列促溶肽的加入，使得棘白菌素B脱酰基酶能够有效且高效表达，发酵培养得到的菌体破碎后酶活可高达57.88U/g。
📄 2021104375548
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2021-04-22
本发明提供了一种基于一碳单位供应的高产D‑泛酸基因工程菌及其构建方法与应用。本发明主要通过强化甘氨酸裂解系统与叶酸合成途径，增强辅因子供应；进一步对丝氨酸路径关键基因的适度强化，合理调控丝氨酸合成速率，增强碳通量流向D‑泛酸的合成，最后通过对D‑泛酸合成途径关键基因进行强化，改善基因工程菌的表达效率，显著增加了D‑泛酸的产量，最终得到一株无质粒、无抗生素添加用于高产D‑泛酸的高产菌株；本发明菌株摇瓶效价达到7.96 g/L，相比出发菌株提高了16.3%，最终运用5 L发酵罐发酵96小时，D‑泛酸产量达到147.3 g/L，大幅度提高了D‑泛酸的合成。
📄 2024117554751
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2024-12-03
一种甾体C14α羟化酶的可溶性表达载体及其构建方法和应用，属于生物技术技术领域。本发明将编码甾体C14α羟化酶的核酸序列和编码可溶性标签麦芽糖结合蛋白的核酸序列在载体中表达，所述编码甾体C14α羟化酶的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述甾体C14α羟化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明建立了真菌来源的酶在大肠杆菌中的可溶性表达载体以及方法，为其他CYP酶在大肠杆菌中异源表达时获得可溶性的成分提供了一种新思路。本发明通过构建分子内递氢系统，显著提升了羟基化过程的电子传递效率，部分解决了P450单加氧酶催化反应中电子传递效率较低导致的整体催化速率较低的问题。
📄 2024116306932
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2024-11-15
本发明涉及一种D‑泛解酸(PA)生产菌、构建方法及应用。所述D‑泛解酸(PA)生产菌是以E.coli DPAL4为底盘菌，将其基因组中的panC基因敲除，并增强panB基因的表达所得。本发明构建所得PA生产菌在补料发酵过程中，PA产量可达13.66g/L，为后续高产PA工程菌的构建奠定了基础。
📄 2021106274842
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2021-06-04
本发明涉及一种棘白菌素B脱酰基酶的高表达重组载体及基因工程菌，以及其在微生物催化制备阿尼芬净中间体——棘白菌素B母核化合物中的应用。所述高表达重组载体包括依次连接的启动子核酸序列、RBS核酸序列、编码MalE信号肽的核酸序列、编码棘白菌素B脱酰基酶β亚基的核酸序列、编码连接肽GGSGGGSG的核酸序列、编码棘白菌素B脱酰基酶α亚基的核酸序列、终止子。本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了一种棘白菌素B脱酰基酶的高表达重组载体，可提高棘白菌素B脱酰基酶在大肠杆菌中的活性表达水平，通过连接肽和信号肽的筛选，使得棘白菌素B脱酰基酶能够有效且高效表达，为阿尼芬净的合成提供了新的途径。
📄 2022113024418
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2022-10-24
本发明公开了一种穿梭质粒载体及其构建方法和应用，所述穿梭质粒载体是将枯草芽孢杆菌质粒pWB980线性化后插入到载体pMD19‑T Simple Vector中构建而成。本发明提供的穿梭载体质粒可在大肠杆菌和多粘类芽孢杆菌中复制。多粘类芽孢杆菌中遗传操作体系尚不成熟、转化步骤较繁琐，且其转化效率相对较低，而大肠杆菌中基因克隆操作十分便利。利用该质粒载体在大肠杆菌中完成外源基因克隆和重组质粒构建工作，便于多粘类芽胞杆菌中开展相关基因功能研究和遗传育种工作，转化率可达7.83±1.54×105CFU/ug DNA。
📄 2017108738099
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2017-09-25
本发明提供了辅酶自足型大肠杆菌及其构建方法，以及其在L‑草铵膦合成中的应用。本发明在大肠杆菌中表达NADH激酶和辅酶合成途径的关键酶，并敲除了分解辅酶的酶，在细胞培养过程中，通过联合代谢中间物的添加，使胞内NADP(H)浓度提高至少50％，谷氨酸脱氢酶催化活力提高2倍。在不对称还原胺化2‑羰基‑4‑(羟基甲基氧膦基)‑丁酸的过程中，NADH激酶继续将胞内NAD(H)转化为NADP(H)，减缓了NADP(H)半衰期过短导致的谷氨酸脱氢酶活力下降，使不对称还原胺化反应进程缩短至少5h，显著提高了该反应的时空产率。
📄 2021110220224
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2021-09-01
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