本公开提供了一种猫冠状病毒S蛋白mRNA的体外转录系统及其构建方法，包括如下步骤:对猫冠状病毒S蛋白mRNA序列进行修饰和优化；将设计好的S蛋白基因片段连接体外转录载体，构建pGEM‑S重组质粒，转入大肠杆菌大量培养，并提取质粒进行线性化处理及胶回收，以获得体外转录的DNA模板；通过体外转录反应获得FCoV S mRNA，并进行加帽及纯化。用同样的技术路线构建了pGEM‑EGFP载体，体外转录成EGFP mRNA；以EGFP mRNA作为报告基因进行细胞转染实验，并在体外转染多种细胞系以验证IVT‑mRNA系统。本发明人首次构建了猫冠状病毒S蛋白mRNA的体外转录系统，可以在细胞水平上高效表达目的蛋白，并可以在不同细胞系中应用，为后期制备猫冠状病毒mRNA疫苗提供了基础。
📄 2023104286596
📂 C12N15_85
👤 龙岩学院
📅 2023-04-20
本发明公开了实现转基因家蚕杂交一代生殖细胞外源DNA自动删除的重组表达载体及其制备方法和应用，首先构建由家蚕生殖腺特异表达基因启动子调控GAL4基因表达的转基因激活载体和由UAS元件调控下游FLP基因表达的转基因效应载体，然后将转基因激活载体和效应载体分别转化家蚕并筛选单拷贝转基因家蚕建立激活系和效应系，再将激活系与效应系家蚕杂交获得双转基因杂交一代家蚕，最终获得基因组中不含目标外源DNA序列的后代家蚕，从而既可实现外源有益蛋白在转基因家蚕特定组织或器官中的表达，又可避免转基因在后代蚕种保留所带来的生物安全隐患。
📄 2022101862359
📂 C12N15_85
👤 西南大学
📅 2022-02-28
本发明提供一种通过特异上调家蚕蜕皮激素应答因子制备转基因丝胶茧的方法及其家蚕品种，其通过在家蚕PSG特异上调家蚕蜕皮激素应答因子，家蚕蜕皮激素应答因子包括BmEcRA、BmUSP、BmE74、BmHR4、BmHR3、BmFtz‑f1，使得家蚕PSG不同程度的退化，影响或阻止了丝素蛋白的合成，通过特异上调家蚕蜕皮激素应答因子制备转基因丝胶茧的方法获得的转基因家蚕具有只生产丝胶蛋白的特性，使其只能生产丝胶茧。该家蚕的蚕丝可作为一种良好的材料使用于医学、军工、光电等各个领域，具有重要的应用价值。
📄 2022102132885
📂 C12N15_85
👤 西南大学
📅 2022-03-04
本发明提供了一种转基因丝胶茧生物反应器的构建方法，其通过转基因技术获得两种丝胶茧系统，选取丝胶茧中丝胶含量较多的一种的丝胶茧为生物反应器，通过以Ser1为启动子，增强型绿色荧光蛋白EGFP为目的基因，构建转基因表达载体并且获得转基因家蚕。本发明根据利用piggyBac介导的家蚕遗传改良技术，利用转基因丝胶茧作为注射受体，在家蚕中部丝腺表达外源蛋白，使外源蛋白的提取和纯化更加容易，为探索开发利用丝胶茧受体表达重组蛋白提供素材基础。
📄 2022102144435
📂 C12N15_85
👤 西南大学
📅 2022-03-04
本发明提供一种通过特异调控家蚕内源丝蛋白提高蚕丝机械性能的方法及其家蚕品种，其中所述通过特异调控家蚕内源丝蛋白提高蚕丝机械性能的方法通过特异启动子FibH、FibL调控家蚕内源丝蛋白FibL、P25基因，育成四种蚕丝机械性能优异的家蚕品系即HL、LL、HP、LP，育成之品系由于丝素蛋白含量和组装的差异，使蚕丝机械性能较其改造前大幅提升，相较改良前提高幅度最大可达1倍以上，该蚕丝可作为一种良好的材料使用于医学、军工、光电等各个领域，具有重要的应用价值。
📄 2022102125010
📂 C12N15_85
👤 西南大学
📅 2022-03-04
本发明提供了一种针对家蚕MSG和PSG表达基因的可控编辑方法，其通过GAL4/UAS系统，分别构建了若干个在家蚕MSG中特异启动表达的GAL4表达载体和多个在家蚕PSG中特异启动表达的GAL4表达载体，通过将表达Cas9基因序列与U6驱动表达的gRNA靶点一起串联在UAS序列下游，最终构建成UAS表达载体，进而利用GAL4/UAS遗传操作工具达到家蚕基因的可控编辑。本发明根据家蚕基因组序列数据库中家蚕基因的序列密码子偏好性，对Cas9蛋白的基因序列进行了优化设计，使Cas9基因更有利于在家蚕丝腺中高效表达。本发明利用该可控的基因编辑技术可精准研究家蚕丝腺基因的功能和创制更多的生物遗传资源。
📄 202210213352X
📂 C12N15_85
👤 西南大学
📅 2022-03-04
本发明公开了家蚕丝胶蛋白Ser4在提高蚕丝性能中的应用及其方法，通过无缝克隆和同源重组，将分子量超过250kDa的完整Ser4蛋白表达到了蚕茧丝胶层中，育成的转基因品系提高了蚕丝力学性能的提高，过表达Ser4品系的蚕丝更加疏水，蚕茧脱胶率减低，有望应用于多丝胶丝制品的生产。
📄 2022115721642
📂 C12N15_85
👤 西南大学
📅 2022-12-08
本发明公开了一种提高抗家蚕杆状病毒感染的方法，具体是使用V‑ATPase Vo复合体抑制剂处理家蚕、通过降低Bm Voa4基因在家蚕中的表达或使Bm Voa4基因突变致功能丧失，研究显示使用4nM的巴佛洛霉素A1处理可以完全抑制病毒的复制，然后选择巴佛洛霉素A1的靶基因进行研究发现，干涉Bm Voa4的细胞中病毒含量显著减少，其在感染后24h和48h的病毒含量分别为对照的74％和68％，但干涉Bm Voa3和干涉Bm Voc并不能减少病毒含量，表明Bm Voa4是巴佛洛霉素A1的靶基因，通过靶向Bm Voa4基因的试剂可用于防治家蚕核型多角体病毒感染的药物研发和生产，具有推广价值。
📄 2021103700301
📂 C12N15_85
👤 西南大学
📅 2021-04-06
本发明公开了家蚕淀粉酶基因BmAmy1的应用及方法，家蚕淀粉酶基因BmAmy1的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，通过对其序列特征进行了分析，并检测了其组织、时期表达特征，通过酵母真核表达系统，表达纯化了BmAmy1蛋白，经体外酶活实验验证了BmAmy1的淀粉酶活性；然后构建了家蚕转基因载体，制备转基因家蚕，对转基因品系的经济性状进行调查分析，结果发现BmAmy1转基因品系在个体大小、全茧重及茧层率等方面均优于对照，且蚕沙中残余淀粉的量也明显少于非转基因对照。因此可通过生物技术手段在家蚕过量表达BmAmy1可实现提高全茧重、茧层率等经济性状的目的为培育更加优良的家蚕品种开辟了崭新的方向。
📄 2020112167650
📂 C12N15_85
👤 西南大学
📅 2020-11-04
本发明公开了Cas9介导的家蚕基因编辑载体，包括组成型基因编辑载体和诱导型基因编辑载体，其中组成型基因编辑载体包括U6启动子调控sgRNA表达的表达框U6‑sgRNA和IE‑1启动子调控Cas9表达的表达框，诱导型基因编辑载体Cas9由Hr3‑39k诱导型启动子调控表达，本发明的Cas9介导的基因编辑载体能够稳定、高效编辑目的基因，为制备昆虫抗病毒转基因素材和具有高效抗病毒的品种提供了有力的工具。
📄 2015106309390
📂 C12N15_85
👤 西南大学
📅 2015-09-29
本发明公开了提高蚕丝纤维力学性能的方法及其产品，通过在家蚕前部丝腺过量表达家蚕铁蛋白亚基，结茧获得力学性能好的蚕丝；所述家蚕铁蛋白亚基的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示；或SEQ ID NO.1所示核苷酸经过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且表达具有与家蚕铁蛋白亚基相同功能的核苷酸序列；对获得的转基因家蚕的蚕丝进行力学拉伸测试发现转基因蚕丝纤维的强度、延展性和韧性均得到提高，表明家蚕铁蛋白亚基可以提高蚕丝力学性能，获得了一种新型蚕丝纤维。
📄 2021102773625
📂 C12N15_85
👤 西南大学
📅 2021-03-15
本发明涉及一种FGF2与TGF‑β1融合基因在促进蚕丝细胞增殖活性和抗炎功能中的应用及方法，通过在家蚕茧丝中同时表达FGF2与TGF‑β1，并培育出能够分泌出同时含有这两个功能性蛋白的蚕丝材料，赋予蚕丝促进细胞增殖的活性以及调节免疫炎性，且无细胞毒性，可以作为伤口敷料原材料在医药领域中进行应用。
📄 2018102142946
📂 C12N15_85
👤 西南大学
📅 2018-03-15
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