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本发明公开了一种稳定表达猪圆环病毒2型ORF3蛋白细胞株的构建及应用,属于生物技术检测领域。构建方法包括以下步骤:(1)在pLVZG‑CMV‑copGFP‑Puro载体的NheI和BamHI多克隆位点插入PCV2 ORF3基因;(2)用构建好的pLVZG‑CMV‑ORF3‑copGFP‑Puro重组质粒与病毒包装质粒共转染293T细胞,培养、出毒、收取病毒上清、过滤得重组慢病毒液;(3)将包装好的重组慢病毒感染PK‑15细胞,通过嘌呤霉素筛选及鉴定,得稳定表达PCV2 ORF3蛋白细胞株。本发明利用重组慢病毒系统制备一种融合标签蛋白并能稳定表达PCV2 ORF3蛋白的细胞株,该细胞株为研究PCV2致病机理研究提供平台,有利于猪圆环病毒2型的深层次的致病机制研究。

本发明公开了由人血白蛋白启动子驱动的用于在细胞中表达白蛋白基因的载体，并在细胞中成功高效表达外源白蛋白。该表达载体由骨架和装载于骨架上的表达框组成，该表达框由人血清白蛋白启动子及其第一个内含子、白蛋白基因、内核糖体进入位点序列(IRES)和标记基因组成。该载体中人血白蛋白启动子和IRES序列驱动白蛋白基因和标记基因同时表达。利用该载体在人细胞中成功高效表达重组人血清白蛋白，分泌到培养液中的白蛋白达到750mg/L，纯度超过90％。该载体为首例用人血白蛋白启动子驱动人血白蛋白基因表达的载体，也是首例用于人细胞或哺乳动物细胞表达白蛋白的载体。该载体还克服了目的基因与筛选标记分用不同启动子的载体系统中在筛选时的高假阳性率和表达不均衡的问题。

本发明提供一种新冠病毒(SARS‑CoV‑2)完整病毒颗粒的检测方法，包括假病毒的产生与滴定、体外假病毒感染、羧基磁珠与抗体的偶联、SARS‑CoV‑2定量RT‑qPCR检测步骤。本发明对血清和HBV的抗干扰能力比直接qPCR检测更显著，检测内分析的变异系数分别为0.83%和5.19%，提示本发明方法对检测完整的SARS‑CoV‑2颗粒具有良好的特异性和稳定性。综上所述，本发明建立了一种基于伪病毒的检测SARS‑CoV‑2完整病毒颗粒的新方法，它将在许多特殊情况下对快速和准确的病毒感染风险评估发挥巨大作用。

本发明涉及一种肿瘤特异性基因表达盒、重组表达载体及构建方法和应用。包括依次连接的启动子、目的基因、接头、第一自杀基因、第二自杀基因和终止子；其中，所述目的基因为黑色素瘤分化相关基因7，所述接头为P2A肽基因序列，所述第一自杀基因为单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因，所述第二自杀基因为胞嘧啶脱氨酶基因。本发明不仅联合了具有极强抗肿瘤能力的mda-7及双自杀融合基因TK-CD，增强了抗肿瘤活性，能有效识别肿瘤位点，而且通过P2A肽基因序列将其连接，使得到的肿瘤特异性基因表达盒或含有该肿瘤特异性基因表达盒的重组表达载体具有很高的转录活性，能够高效地表达，为肿瘤的治疗提供了新的途径。