本发明公开了扩增犬冠状病毒E、M、N基因全序列的引物对及其应用。属于分子生物学技术领域。用于扩增犬冠状病毒E、M、N基因全序列的引物对，其核苷酸序列如下：上游引物CCoV‑EMN1：GCCCGTAGYCGGTGTTTA；SEQIDNO:1；其中，Y为C或T；下游引物CCoV‑EMN2：TTCCATTGTTGGCTCGTC；SEQIDNO:2。本发明通过一步扩增法，无需多次扩增、裁剪，仅需通过一次PCR扩增即可实现犬冠状病毒E、M、N全基因的扩增，操作简便快捷，避免单个基因扩增的重复性，增加了基因扩增的保真性，并且克服了因基因变异导致的目的片段无法扩增的风险。
📄 2022107525683
📂 C12N15_10
👤 龙岩学院
📅 2022-06-28
本发明公开了一种改进的重叠延伸PCR方法，本发明通过添加引物，在重叠延伸PCR过程中能利用引物进行指数扩增，有效提高克隆效率和插入片段的长度，如实施例1所示，传统方法无法获得目的克隆，而本发明方法克隆数提高约10倍的同时阳性率为50％；能在载体同一位置同时插入多个片段；能在载体不同位置同时插入、删除及置换多个片段。
📄 2018111289070
📂 C12N15_10
👤 明科生物技术(杭州)有限公司
📅 2018-09-27
利用芯片合成寡核苷酸文库进行DNA洗牌文库从头合成的方法，主要包括：结合比对软件进行亲本序列切割成寡核苷酸序列；利用错配结合蛋白MutS固定化纤维素柱进行寡核苷酸文库的高通量纠错；使用切割后的寡核苷酸进行全长重组文库组装。本发明的方法与现有的方法相比，重组率高，降低了组装成为全长基因序列的难度，并降低了合成成本，提高了序列的多样性，oligo pool的准确性，合成基因文库的保真性和重组的概率。
📄 2019102158807
📂 C12N15_10
👤 江苏师范大学
📅 2019-03-21
本发明公开了一种天然水体中胞内外DNA精准提取的方法，属于生物领域中的DNA提取技术。该方法向含有透明胞外聚合物颗粒的目标水体中加入能够和金属离子结合的提取剂，使透明胞外聚合物颗粒均匀分散后在提取剂的作用下完全破裂，并将其上的胞内外DNA释放到目标水体后进行离心处理，得到含有所有胞内外DNA的上清液。将上清液通过滤膜过滤处理，将胞外DNA收集到滤液中，胞内DNA收集到滤膜上，完成目标水体中的胞内外DNA精准分离。本发明可以有针对性的、精准提取天然水体中的胞内外DNA，解决水体中传统胞外DNA提取方法对胞外DNA含量严重低估的问题，对于水生生物生态系统中微生物群落结构、抗性基因、功能基因、物质循环等方面的研究有重要意义。
📄 2023102847897
📂 C12N15_10
👤 浙江工业大学
📅 2023-03-22
一种番茄基因和丹参內源基因提高丹参抗虫和活性成分的方法，由番茄prosystemin基因克隆、构建含有番茄prosystemin基因和丹参咖啡酰?O?甲基转移酶基因干涉片段的植物表达载体、制备含有番茄prosystemin基因和丹参咖啡酰?O?甲基转移酶基因干涉片段的植物表达载体的根癌农杆菌菌株、制备转基因丹参植株步骤组成。将番茄prosystemin基因转入丹参植株，干涉了丹参咖啡酰?O?甲基转移酶基因，抗虫性明显高于野生丹参，生长100天转基因的丹参根中，迷迭香酸、丹酚酸B、丹参酮IIA含量，分别是同时期非转化丹参根中迷迭香酸和丹酚酸B和丹参酮IIA的1.31倍、1.69倍、2.62倍。
📄 2014102342037
📂 C12N15_10
👤 陕西师范大学
📅 2014-05-29
一种土壤微生物基因组的提取方法，采用Ca(OH)2水溶液、磷酸盐和NaOH溶液对土壤进行预处理使土样分散均匀释放被土质包裹的细胞，用溶菌酶、蛋白酶k和SDS共同作用裂解细胞，氯仿/异戊醇变性蛋白质，乙醇沉淀DNA得到粗提物，再用BaCl2和CaCl2混合液对粗提DNA溶液处理进一步去除腐殖酸等杂质，再用乙醇沉淀得到纯化的基因组DNA。采用本方法得到的DNA纯度和产量均可用于后续PCR等操作中，并且可在4h之内完成，使用常规试剂，不仅大大节约了时间，而且适合在实验室进行。上述提取方法也适用于其他土质如粘性土壤和沙质土壤，也适用于河底污泥等。
📄 2014107080986
📂 C12N15_10
👤 陕西科技大学
📅 2014-11-27
本发明公开一种斑重唇鱼线粒体基因组全序列扩增方法，具体步骤如下：（1）斑重唇鱼线粒体Cyt b、COI、ND4和16S rRNA四个基因片段的扩增；（2）斑重唇鱼线粒体基因组的LA‑PCR扩增。本发明扩增了斑重唇鱼线粒体Cyt b、COI、ND4和16S rRNA四个基因片段，根据获得序列设计了4对LA‑PCR引物进行大片段序列扩增，然后通过引物步移的方法，用28条测序引物对斑重唇鱼线粒体基因组其余部分进行PCR扩增从而获得斑重唇鱼长度为16895 bp的线粒体全基因组序列。从分子水平研究斑重唇鱼的遗传与进化，特别是以mtDNA作为分子标记，为斑重唇鱼物种鉴定、群体遗传结构和系统演化研究提供了基础资料和技术支持。
📄 2016110678617
📂 C12N15_10
👤 浙江海洋大学
📅 2016-11-29
本发明公开了一种多功能磁性DNA纳米球，所述多功能磁性DNA纳米球包括：结合有磁珠的DNA纳米球和/或含双硫键的结合磁珠的DNA纳米球。本发明通过一条磷酸化的线性DNA模板单链和一条DNA引物单链即可完成纳米球的组装；在组装纳米球的过程中，通过对另一条DNA引物单链进行不同的修饰以及对磷酸化的线性DNA模板单链进行结构设计，可以在纳米球结构中组装多种功能基团。本发明的多功能磁性DNA纳米球可以作为靶向运输的药物载体，而且易于实现生物分离；将制备多功能磁性DNA纳米球的DNA引物单链用双硫键进行修饰，还可实现对细胞内巯基化合物的检测。
📄 201710116597X
📂 C12N15_10
👤 临沂大学
📅 2017-02-28
本发明公开了一种腐乳微生物群落DNA的提取试剂及提取方法，该提取试剂包括细胞分离液、细胞冲洗液、细胞裂解液、PCR抑制物质沉淀液和清洗液。本申请从腐乳样品大豆残渣含量高，有机酸、氨基酸丰度的特征出发，设计了腐乳微生物回收、细胞裂解、PCR反应物质去除及DNA高效回收过程。在去除PCR抑制物质方面，应用硫酸铵、盐酸胍和CTAB相结合的方法，同时去除多糖、多酚及干扰蛋白。从而获取高质量DNA用于后续的分子生物学实验。本方法可同时提取腐乳细菌及真菌的DNA，所提取的DNA成功用于16S rRNA及ITS基因的PCR反应及高通量测序，也成功应用于宏基因组测序及分析。
📄 2019110222608
📂 C12N15_10
👤 电子科技大学中山学院
📅 2019-10-25
本发明提供一种核酸纯化辅助剂及使用方法，所述辅助剂为聚丙烯腈粉，其添加量为核酸提取液的3‑8%，可显著改进核酸纯化方法，其优点为：便于操作，提高得率和纯度，降低污染，同时减少了操作人员与有害苯酚的接触概率。
📄 2020114339204
📂 C12N15_10
👤 聊城大学
📅 2020-12-10
本申请公开了一种改性硅藻土提取核酸的方法及应用。该改性硅藻土对核酸扩增反应没有抑制作用且可以富集大量核酸，提高核酸可扩增反应灵敏度。将该改性硅藻土应用于扩增反应，可集核酸提取、扩增、检测于一体，结合快速扩增手段，整个反应可在40min内完成，降低了核酸检测成本，提高了检测效率。
📄 2021114077460
📂 C12N15_10
👤 青岛科技大学
📅 2021-11-24
本发明公开了提取木质纤维素厌氧发酵物料微生物DNA的方法及其成套试剂。本发明所提供的方法，包括下述步骤S1)和S2)：S1)用洗脱液洗下物料上的微生物，得到微生物洗脱液，除去所述微生物洗脱液中的杂质，得到所述微生物；S2)提取所述微生物的DNA得到所述微生物DNA；所述洗脱液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其浓度分别为9.0g/L氯化钠、0.12g/L氯化钾、0.24g/L氯化钙、0.2g/L碳酸氢钠和0.15g/L磷酸二氢钾。实验证明，本发明的提取木质纤维素厌氧发酵物料微生物DNA的方法及其成套试剂可以用来提取不同木质纤维素厌氧发酵物料的微生物DNA。
📄 2015101808585
📂 C12N15_10
👤 乐山师范学院
📅 2015-04-16
柿子坊 · 知识产权运营
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