专利交易市场

本发明涉及本发明涉及一种高通量诱变筛选高产两性霉素B结节链霉菌的方法，以及筛选到的诱变株，由诱变株获得的重组工程菌及应用。本发明筛选获得的一株高产两性霉素B结节链霉菌菌株——结节链霉菌(Streptomyces nodosus)ZJB2016050。本发明的有益效果主要体现在：1、通过高通量筛选高产两性霉素B菌种的方法，能够方便快速高效地检测两性霉素B的产量，提高了诱变育种和基因工程菌株的筛选或验证效率。2、诱变育种获得的结节链霉菌N5，相对原始菌株N3，两性霉素B产量提高了20％，能够作为基因工程菌的原始菌株。3、通过过表达功能基因分别提高两性霉素B的产量，其中乙酰辅酶A羧化酶1(acc1)提高两性霉素B产量20％。4、卡那霉素价格优廉、抗菌谱广、杀菌作用强，适用于工业中使用，对于企业总体收益率有较强提高作用，以实验室5L罐为计算，能降低成本约2000元/罐。

本发明公开了一种电刺激提高菌株生理生化活性的方法及其应用。本发明方法通过惰性电极构建了解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）ZJK1或贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）ZJK2菌株培养的电极体系，将活化的菌株用低压直流电刺激，将温度维持在30‑37℃，培养16‑24h，能够提高功能菌株的生化活性20‑50%，发酵密度提高1‑2倍以上。该方法极大的提高菌株的生化活性和发酵密度，工艺简单，操作简便，成本低廉。

本发明公开一种利用高压脉冲电场促进酿酒酵母增殖及发酵的方法。本发明将酿酒酵母划线至固体种子培养基培养，挑取单菌落接种于种子培养基中培养至对数生长期，获得所需种子液；种子液接入发酵培养体系中，发酵培养体系保持流动状态进行发酵培养，且同时将发酵培养体系置于高压脉冲电场处理室中进行高压脉冲电场处理；高压脉冲电场处理参数为：脉冲宽度为5μs，脉冲频率5～20Hz，脉冲电场强度为1～6kV·cm-1；本发明采用的高压脉冲电场参数可提高酵母细胞内酶的活性，同时糖酵解通路中相关基因的表达量得到提高。在本发明提出的高压脉冲电场参数刺激下，酿酒酵母的增殖速度及发酵活动得到加强，发酵周期缩短，酒精产量提高。