本发明公开了一种草铵膦脱氢酶突变体、工程菌、固定化细胞及应用，所述突变体是将SEQ ID No.2所示草铵膦脱氢酶氨基酸序列的第145位、第384位、第348位、第292位、第202位、第70位、第78位进行单突变或多突变获得的。本发明草铵膦脱氢酶突变体与甲酸脱氢酶共表达工程菌的固定化细胞，以2‑羰基‑4‑(羟基甲基膦酰基)‑丁酸底物催化还原为L‑草铵膦，实现不对称合成L‑草铵膦，无需昂贵的化学拆分试剂，提高其热稳定性和操作稳定性，实现重复使用。固定化细胞酶活为162.5U/g，酶活回收率为78.1％，可以通过过滤回收，并可重复使用20批次以上保持100％转化率，极大降低了生产成本。
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