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本发明公开了一种泛生菌酰胺酶突变体、基因、工程菌及其应用，所述酰胺酶突变体是将SEQ ID No.2所示泛生菌酰胺酶氨基酸序列第105位、175位、301位、305位或309位进行单突变或多突变获得的。本发明提供的泛生菌酰胺酶突变体较亲本活力提高2～3倍，对底物2-氯烟酰胺的耐受能力超过200mM，通过补料甚至超过1M，并且转化率仍能够保持在95％以上。利用本发明中所述的补料方法能够有效减轻2-氯烟酸对酰胺酶或菌体的产物抑制效应，在保证较高催化效率的同时使得产物2-氯烟酸尽可能地析出，方便产物的提取纯化。因此，本发明的酰胺酶突变体可以可用于酶法工业化生产2-氯烟酸。

本发明公开了一种重组棘白菌素B脱酰基酶突变体及在生物催化棘白菌素B合成棘白菌素B母核中的应用，所述脱酰基酶突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸序列第287位、527位进行单突变或双突变获得；本发明通过突变auebda基因序列，改变AuEBDA一级结构和酶的构象，提高AuEBDA的催化性能。本发明系统分析了G287Q和R527V取代对ECB脱酰酶活性的影响。本发明构建的双突变体AuEBDA-G287Q/R527V的酶活较亲本酶野生型AuEBDA酶活提高2.5倍，催化效率kcat/Km增加2.9倍。

本发明公开了一种酰胺酶突变体、编码基因、工程菌及其在拆分2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺制备(S)‑2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺中的应用，所述酰胺酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第154位甘氨酸替换为天冬酰胺、苯丙氨酸或谷氨酸获得的。本发明提供的酰胺酶突变体较亲本活力提高1.8倍，对映体选择率(E值)由42提高至162，进一步提高了酰胺酶法生产(S)‑2,2‑二甲基环丙烷甲酰胺的效率。

本发明属于基因工程和酶学领域，具体涉及脱乙酰基酶突变体及其在合成烯草酮中的应用，所述脱乙酰基酶突变体是由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第272位、92位、203位、304位、305位、306位、270位进行单点突变或多点突变，得到了对底物氯代乙酰胺特异性提高的突变体，其可以催化底物氯代乙酰胺合成氯代胺，用于后续烯草酮的生产，与野生型相比，突变体Y305E、Y305E/G304L、Y305E/H306F相对酶活提高分别是野生型的7.8倍、9.6倍、10.3倍，其中Y305E催化效率比野生型提高3.2倍，Y305E/H306F的催化效率比野生型提高4.2倍。使用本发明提供的脱乙酰基酶突变体合成氯代胺时，反应条件温和、对环境无害，且反应时间短，具有大规模生产氯代胺以及后续产品的应用前景。

本发明公开了一种酰胺酶突变体及其在催化合成2‑氯烟酸中的应用，属于酶工程技术领域。所述酰胺酶突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第378位、402位或403位进行单位点突变或多位点突变获得。本发明提供的酰胺酶突变体较亲本活力大幅提高，在使用该酶的粗提取物或工程菌全细胞进行催化时，反应酶活仍然保持较高状态。此外，本发明的酰胺酶突变体能够适应30～55℃的催化温度，为工业化酶法生产2‑氯烟酸奠定了基础。

本发明涉及一种催化性能明显改善的棘白菌素B脱酰基酶突变体、编码基因，含有编码基因的载体、基因工程菌，以及其，以及所述突变体在催化合成阿尼芬净医药中间体——棘白菌素B母核中的应用。所述棘白菌素B脱酰基酶突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸经单点突变或多点联合突变获得。本发明以扩大催化底物口袋为基础进行理性设计，利用三维结构模拟结合酶学性质分析，提供了一种催化性能更好的ECB脱酰基酶突变体，可用于阿尼芬净中间体的制备，为阿尼芬净的合成提供了新的途径。

本发明公开了一种几丁质脱乙酰基酶突变体及其编码基因与应用，通过对海洋圆杆菌(Cyclobacterium marinum)来源的几丁质脱乙酰基酶进行定向进化的研究，利用先进的计算机辅助理性设计技术对亲本几丁质脱乙酰基酶进行热稳定性的筛选，最终得到了一株热稳定性显著提高的几丁质脱乙酰基酶突变体A58C/133C。本发明突变体A58C/133C在50℃下的半衰期是野生型几丁质脱乙酰基酶的1.3倍，氨基葡萄糖的产量提高了16%。同时，借助计算机模拟技术，对热稳定性提高的原理进行了分子层面的解释。本发明得到的突变体比野生型几丁质脱乙酰基酶更加适用于氨基葡萄糖的工业应用，具有良好的市场应用前景和工业价值。

本发明公开了一种具有多重耐受性、可降解氨基甲酸酯及酰胺类化合物的酰胺酶。该酶能够高效降解氨基甲酸酯类和酰胺类化合物，具有极高的盐耐受性及酸耐受性。本发明利用大肠杆菌表达系统成功实现了酰胺酶基因的高效表达及酶蛋白的纯化，纯酶的比酶活力高达397.5U/mg。NaCl浓度不高于5％(w/v)时，盐对于该酶的活力具有较大的促进作用，不超过18％(w/v)NaCl条件下，依然可以保持75％及以上的酶活力；在pH 4.5条件下仍可保持40％的酶活力，且该酶在pH 4.0‑5.0条件下放置6h后，可保持43％‑85％左右的酶活力，具有较强的酸耐受性。同时具有一定的乙醇耐受性。本发明制备的酰胺酶为实现高盐发酵食品及低酒精度酒精饮料中杂质的消除奠定了基础，具有巨大的经济及社会效益。

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种耐乙醇酰胺酶、基因、表达载体、工程菌及制备方法和应用，所述酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。该酰胺酶能够耐受高浓度乙醇、可降解氨基甲酸乙酯，但不降解尿素。本发明所获得的酰胺酶可在含有高浓度乙醇条件下高效降解氨基甲酸乙酯且不降解尿素，有助于该酶高效的运用于酒精饮料中氨基甲酸乙酯的降解。本发明为实现酒精饮料中致癌物氨基甲酸乙酯的降解奠定了基础，具有巨大的经济及社会效益。