本发明公开了一种腈水解酶突变体、工程菌及其在合成(R)‑3‑氰基己酸中的应用，所述腈水解酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第135位、第199位、第59位进行单突变或多突变获得的。本发明通过定向进化技术提升腈水解酶活性及立体选择性构建了腈水解酶突变体，与亲本腈水解酶PgNITmut相比，突变体PgNITmut/F135L对底物3‑氰基己腈的对映体选择率(E值)由332提升至419；突变体PgNITmut/F135L/R199W活力提升1.36倍，E值提升至461；突变体PgNITmut/F135L/R199W/T59D活力提升2.05倍，E值提升至569。本发明腈水解酶突变体具有较高的活性及立体选择性，利用高效腈水解酶法合成布瓦西坦手性中间体(R)‑3‑氰基己酸，大幅度降低工业化生产成本，在布瓦西坦工业化生产中具有良好的应用前景。
📄 2023102021266
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2023-02-23
本发明公开了一种腈水解酶突变体及其在制备1-氰基环己基乙酸中的应用，所述突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第180位，第205位氨基酸中的一位或多位进行突变获得的。本发明经过半理性设计，对蛋白质进行分子改造，腈水解酶双突变体AcN-G180D/A205C的比酶活最高提高了1.6倍，转化率>99％，且利用含有腈水解酶突变体的重组大肠杆菌在高温下(50℃)水解1-氰基环己基乙腈，反应时间缩短为原来的四分之一。因此，本发明所获得的突变体在高效催化1-氰基环己基乙腈合成加巴喷丁中间体1-氰基环己基乙酸中具有良好的应用前景。
📄 2020101279277
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2020-02-28
本分案申请公开了一种热稳定性和活力提高的腈水解酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明以芜菁/高山南芥腈水解酶嵌合体BaNIT的三突变体BaNITmut为亲本，运用定点突变对127位点和260位点进行改造，所获得的腈水解酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.8所示。相比于亲本腈水解酶，本发明提供的腈水酶突变体催化外消旋异丁基丁二腈的活力及温度稳定性分别有所提高；同时副产物(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酰胺含量减少；操作易于控制，生产成本低，产品光学纯度高，在高效催化异丁基丁二腈合成(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸中具有良好的应用前景。
📄 2021112822473
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2020-01-13
本发明公开了一种腈水解酶突变体及在普瑞巴林手性中间体合成中的应用，属于生物工程技术领域。本发明以芜菁/高山南芥腈水解酶嵌合体BaNIT的三突变体BaNITmut为亲本，运用定点突变对127位点和260位点进行改造，所获得的腈水解酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.8。相比于亲本腈水解酶，本发明提供的腈水酶突变体催化外消旋异丁基丁二腈的活力及温度稳定性分别有所提高；同时副产物(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酰胺含量减少；操作易于控制，生产成本低，产品光学纯度高，在高效催化异丁基丁二腈合成(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸中具有良好的应用前景。
📄 2020100320503
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2020-01-13
本发明公开了一种腈水解酶突变体及其应用，所述突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第201位，第339位和第343位氨基酸中的一位或多位进行突变获得的。本发明经过蛋白质分子改造，腈水解酶AcN纯酶的热稳定性最高提高了14倍，且利用含有腈水解酶突变体的重组大肠杆菌在高温下(45℃)水解1‑氰基环己基乙腈，反应时间缩短为原来的三分之一。因此，本发明所获得的突变体在高效催化1‑氰基环己基乙腈合成加巴喷丁中间体1‑氰基环己基乙酸中具有良好的应用前景。
📄 2017103255699
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2017-05-10
本分案申请公开了一种十字花科植物腈水解酶嵌合酶突变体，属于生物工程技术领域。本发明将高山南芥腈水解酶氨基酸序列的225‑285位肽段嵌入到缺失对应肽段的芜菁腈水解酶中，获得芜菁/高山南芥腈水解酶嵌合体BaNIT，进而对嵌合体BaNIT的编码基因进行定点饱和突变，使得嵌合体氨基酸序列的第223位的L突变为Q，获得植物腈水解酶嵌合酶突变体BaNIT‑L223Q。本发明提供的植物腈水解酶嵌合酶突变体的催化活力提高1.31倍，重组蛋白的可溶性提高，对映体选择率E值保持在400以上，在高效催化外消旋异丁基丁二腈合成(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸中具有良好的应用前景。
📄 2021100546097
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2018-07-12
本分案申请公开了一种十字花科嵌合型植物腈水解酶突变体，属于生物工程技术领域。本发明将高山南芥腈水解酶氨基酸序列的225‑285位肽段嵌入到缺失对应肽段的芜菁腈水解酶中，获得芜菁/高山南芥腈水解酶嵌合体BaNIT，进而对嵌合体BaNIT的编码基因进行定点饱和突变，使得嵌合体BaNIT的第279位的Q突变为E，获得嵌合型植物腈水解酶突变体BaNIT‑Q279E。本发明提供的植物腈水解酶突变体的催化活力提高1.41倍，重组蛋白的可溶性提高，对映体选择率E值保持在400以上，在高效催化外消旋异丁基丁二腈合成(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸中具有良好的应用前景。
📄 2021100545817
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2018-07-12
本发明公开了一种十字花科植物腈水解酶突变体，属于生物工程技术领域。本发明将高山南芥腈水解酶氨基酸序列的225-285位肽段嵌入到缺失对应肽段的芜菁腈水解酶中，获得芜菁/高山南芥腈水解酶嵌合体，进而对嵌合体BaNIT的编码基因进行定点饱和突变，获得植物腈水解酶突变体，所述的植物腈水解酶突变体为下列之一或其中两种以上：(1)第223位的L突变为Q；(2)第263位的H突变为D；(3)第279位的Q突变为E。本发明提供的植物腈水解酶突变体的催化活力提高2.23倍，重组蛋白的可溶性大幅提高，对映体选择率E值保持在400以上，在高效催化外消旋异丁基丁二腈合成(S)-3-氰基-5-甲基己酸中具有良好的应用前景。
📄 2018107650475
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2018-07-12
本发明公开了一种腈水解酶突变体及其在水解吡啶腈衍生物中的应用，所述腈水解酶突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第59位、第134位、第135位或第192位氨基酸进行单突变或多突变获得的。本发明经过半理性设计，对蛋白质进行分子改造，其中腈水解酶四突变体AcNR‑W59A/T134G/H135L/S192G对4‑TCN的催化活性提升了约142倍，对蓖麻碱的催化活性提升了约77倍，同时保持了完全的水解活性。本发明报道的腈水解酶突变体对多种吡啶腈类物质拥有很高的催化活性，在农药和饲料生产中具有广泛而良好的应用前景。
📄 2024116908246
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2024-11-25
本发明公开了一种腈水解酶突变体及其在催化合成2‑氯烟酸中的应用，所述腈水解酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第162位、第127位或第139位进行单突变或多突变获得的。本发明提供的腈水解酶突变体I127V/D139E/W162G，消除亲本腈水解酶对2‑氯烟腈的水合活力，催化过程无副产物2‑氯烟酰胺产生，且腈水解活力大幅提高，可专一性催化2‑氯烟腈水解合成2‑氯烟酸，在酶法工业化合成2‑氯烟酸中具有重要潜力。
📄 2021114957210
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2021-12-09
本发明公开了一种腈水解酶突变体及其构建方法和在普瑞巴林手性中间体合成中的应用，属于生物工程技术领域。本发明分别以芜菁腈水解酶BrNIT和拟南芥腈水解酶AtNIT为亲本，运用肽段替换，将高山南芥腈水解酶AaNIT的225-285位肽段替换BrNIT氨基酸序列的226-286位和AtNIT氨基酸序列的225-285位，获得氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ IDNO.3所示的腈水解酶突变体BrNIT225-285及AtNIT225-285。相比于野生型腈水解酶，本发明提供的腈水解酶突变体催化水解外消旋异丁基丁二腈的活力及产物的立体选择性显著提高，可以满足工业化应用要求，同时在高效催化外消旋异丁基丁二腈合成3-氰基-5-甲基己酸中具有良好的应用前景。
📄 2018101364094
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2018-02-09
本发明属于基因工程技术领域，公开了一种基于深度学习改造的热稳定性高的酶突变体。上述深度学习的方法，可应用于酶分子改造。本发明采用深度学习方法，可以筛选到优势突变体。本发明发现了调控酶热稳定性的关键氨基酸残基，对酶在高温下的催化性能改良具有重要指导意义，同时本发明为酶在工业生产中的大规模应用提供有力借鉴。
📄 202411427508X
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2024-10-14
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