本发明公开了一种改变脂肪酶催化活性的活性重塑方法，属于酶工程技术领域。本发明通过脂肪酶体外重塑过程中添加不同的调节因子，获得具有高酯化活性的重构脂肪酶，以满足脂肪酶非水相催化的需要。将不具有酯化活性或者活性较低的各种微生物脂肪酶，包括大肠杆菌工程菌外源表达的脂肪酶以及商品脂肪酶，经8M尿素变性处理，在复性过程中添加从华根霉细胞提取的膜环境复合物WTS，可获得酯化活性显著提高的活性重塑脂肪酶，同时脂肪酶常见的水解活性也发生变化。酯化活性的恢复使脂肪酶更适合工业化应用。
📄 2016102619532
📂 C12N9_20
👤 江南大学
📅 2016-04-25
本发明公开了一种米曲霉脂肪酶突变体及在拆分(R,S)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸酯制备(R)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸酯中的应用，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第38位或第230位进行定点饱和单突变或多突变获得的。本发明通过比较突变体酶AOL‑3F38N、AOL‑3F38N‑V230R和未突变酶AOL‑3的水解能力，结果发现突变体酶AOL‑3F38N、AOL‑3F38N‑V230R的水解活性是未突变脂肪酶的3.4倍和4.0倍，改造后的脂肪酶的热稳定性在50℃以后表现的更好，(R)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸酯产率提高，更加适合工业化生产。
📄 2019102834956
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2019-04-10
本发明公开了一种脂肪酶突变体及其在制备(S)‑2‑氯苯甘氨酸甲酯中的应用，该脂肪酶突变体由SEQ ID No.2所示氨基酸序列第157位的谷氨酰胺突变为苯丙氨酸，第189位的异亮氨酸突变为赖氨酸，且第154位的缬氨酸突变为天冬氨酸而获得。本发明通过分子对接和定点饱和突变，筛选获得了可明显缩短不对称水解反应时间且对R型2‑氯苯甘氨酸甲酯方拆分效率高、选择性高的脂肪酶突变体，该突变体在反应12h后(S)‑2‑氯苯甘氨酸甲酯的得率达到了72.81％，ee值为95.24％，相对于野生型来说，实现了活性的提高和选择性的反转，同时缩短了反应时间。
📄 2020100362224
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2020-01-14
本发明公开了一种印迹脂肪酶及其应用，所述印迹脂肪酶按如下方法制备：将印迹分子加入脂肪酶酶液中，搅拌溶解，调节pH为7.2‑7.8，搅拌印迹反应完全后，加入大孔树脂，搅拌吸附完全后，将反应液过滤，滤饼洗涤干燥，即获得印迹脂肪酶；本发明以麦芽糖或蔗糖为印迹分子，与有机酸和酯类化合物为印迹分子比较，印迹体系不需要表面活性剂与醇类助溶剂，印迹分子在水溶液中与脂肪酶分子的结合更优。麦芽糖印迹的脂肪酶，催化低聚糖酯化的应用面较广，以蔗糖为例，催化其乙酯合成，酯化率与酯化选择性均优于未印迹的脂肪酶，本发明酯化率高达86.6％，酯化选择性高达85.4％。
📄 2018113149756
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2018-11-06
本发明提供了一种米曲霉脂肪酶及在拆分制备布瓦西坦中间体的应用，所述米曲霉脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，以发酵培养获得的湿菌体经冷冻干燥后得到的干菌体为催化剂，外消旋2‑(2‑叔丁氧基‑2‑氧代乙基)戊酸甲酯为底物，以pH7.0磷酸缓冲溶液为反应介质，在20‑60℃、1000rpm条件下进行拆分制备布瓦西坦中间体R‑2‑(2‑叔丁氧基‑2‑氧代乙基)戊酸，质量收率达到49.5％，产物R‑2‑(2‑叔丁氧基‑2‑氧代乙基)戊酸经甲酯化后对映体过量值>99％。
📄 2019106059139
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2019-07-05
本发明公开了一种用于水解磷脂的改性脂肪酶及其制备方法与应用，所述改性脂肪酶按如下方法制备：将脂肪酶水溶液调pH至3.5～4.5，室温静置1～2小时；然后在搅拌下滴加体积浓度为0.01‑1.0％的戊二醛水溶液后，室温静置1～3小时，离心，沉淀用去离子水洗涤，干燥至水含量5.0％以下，获得改性脂肪酶。本发明采用戊二醛与脂肪酶蛋白分子结合，引起酶蛋白空间构型的改变，对脂肪酶蛋白分子的空间构型进行物理改性，提高脂肪酶对磷脂的水解效果。本发明改性脂肪酶提高磷脂的亲水亲油平衡值，增强其乳化性能，从而制造亲水性强的磷脂食品乳化剂，大幅降低亲水磷脂的生产成本，经济效益明显。
📄 2022111806393
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2022-09-27
本发明公开了一种重组脂肪酶突变体、工程菌及其制备(2S,3R)‑N‑乙酰‑哌啶‑2,3‑二甲酸二甲酯应用，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第140位、141位、144位、189位、第190位进行单突变或者组合突变获得的。该突变体相比于野生型酶在转化上述反应时催化活力和底物耐受性大大提高，反应进程耗时明显缩短。相比于化学法制备(S,S)‑2,8‑二氮杂双环[4,3,0]壬烷，本发明提供的技术所得产品立体选择性高，反应条件更加温和，对设备要求低，降低了反应成本，且对环境友好。
📄 2018109242201
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2018-08-14
本发明公开了一种来源于嗜热踝节菌的脂肪酶突变体、编码基因及其在水解外消旋2‑羧乙基‑3‑氰基‑5‑甲基己酸乙酯合成(3S)‑2‑羧乙基‑3‑氰基‑5‑甲基己酸中的应用，所述突变体是将SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第206位、207位和259位氨基酸中的一位或多位进行突变后获得。经过蛋白质分子改造，TTL立体选择性水解CNDE的活力由4.50U/mg提高到160.55U/mg，远高于目前已报道的脂肪酶水解CNDE的活力。因此，本发明所获得的突变体在高效催化CNDE合成普瑞巴林手性中间体(3S)‑2‑羧乙基‑3‑氰基‑5‑甲基己酸中具有良好的应用前景。
📄 2017100712851
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2017-02-09
本发明公开了一种重组脂肪酶突变体、基因、载体、工程菌及其应用，所述突变体是丝孢堆黑粉菌脂肪酶(Sporisoriumreilianum SRZ2lipase，SRL)出发经过突变得到的。本发明中，脂肪酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第145位、194位进行单突变或者组合突变获得的。该突变体相比于野生型酶在转化上述反应时催化活力和底物耐受性大大提高，反应进程耗时明显缩短。相比于化学法制备(S,S)‑2,8‑二氮杂双环[4,3,0]壬烷，本发明提供的技术所得产品立体选择性高，反应条件更加温和，对设备要求低，降低了反应成本，且对环境友好。
📄 201910605485X
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2019-07-05
本发明公开了一种磁性固定化脂肪酶及在拆分1‑甲基‑3‑苯丙胺制备(R)‑(+)‑N‑乙酰基‑1‑甲基‑3‑苯丙胺中的应用，本发明采用二硫化碳代替戊二醛，在磁性颗粒表面引入了二硫代氨基甲酸酯与脂肪酶进行共价结合，本发明制备磁性固定化脂肪酶的方法简单安全，明显优于戊二醛交联的酶固定化方法。同时，本发明将磁性固定化脂肪酶应用于交变磁场中催化不对称酰化反应实现连续化制备(R)‑(+)‑N‑乙酰基‑1‑甲基‑3‑苯丙胺。本发明方法简单、安全有效、易于分离；拆分1‑甲基‑3‑苯丙胺获得R‑构型产物的对映体过剩值达到了98.5％，拆分效果优越。
📄 2019114085737
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2019-12-31
本发明公开了一种高温下制备(R)‑(+)‑N‑乙酰基‑1‑甲基‑3‑苯丙胺的方法，所述方法为：以1‑甲基‑3‑苯丙胺为底物，以固定化脂肪酶Novozym435为催化剂，加入有机溶剂和酰化试剂，在40‑80℃、1000rpm磁力搅拌条件下拆分反应2‑10h，反应结束后，反应液分离纯化，获得(R)‑(+)‑N‑乙酰基‑1‑甲基‑3‑苯丙胺；本发明反应中的底物仅在4个小时达到了35.6％的转化率(拆分反应转化率最高为50％)，R‑构型产物的ee值达到了98.3％。用到的脂肪酶为颗粒状的固定化脂肪酶，容易与反应液快速分离开。
📄 2019114085953
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2019-12-31
本发明公开了一种重组脂肪酶突变体、基因、载体、工程菌及其制备(2S,3R)‑N‑乙酰‑哌啶‑2,3‑二甲酸二甲酯的应用，所述脂肪酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第145位、154位、194位、195位进行单突变或者组合突变获得的。该突变体相比于野生型酶在转化上述反应时催化活力和底物耐受性大大提高，反应进程耗时明显缩短。相比于化学法制备(S,S)‑2,8‑二氮杂双环[4,3,0]壬烷，本发明提供的技术所得产品立体选择性高，反应条件更加温和，对环境友好，且对设备要求降低，大大减少了生产成本。
📄 2020102297412
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2020-03-27
柿子坊 · 知识产权运营
柿子坊知识产权运营平台