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本发明涉及一种多酶级联制备L‑乙烯基甘氨酸的方法，以苏氨酸为原料，添加L‑氨基酸氧化酶和/或D‑氨基酸氧化酶进行生物催化反应得到β‑羟基丁酮酸；β‑羟基丁酮酸在乳酸脱水酶或苯基乳酸脱水酶的作用下，反应得到3‑烯‑丁酮酸；将制备得到的3‑烯‑丁酮酸中加入L‑谷氨酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶，反应得到L‑乙烯基甘氨酸。制得精细化工中间体L‑乙烯基甘氨酸，总收率75%‑90%，光学纯度为99%以上。该中间体的合成，不用各氨基和羧基的各种保护，不用高温和强酸。将L‑乙烯基甘氨酸在冰醋酸条件下，与甲基亚磷酸乙酯加成反应后，经过酸解、氨中和、甲醇重结晶，可以得到光学纯度大于99%，收率大于95%的精草铵膦。

本发明公开了一种利用化学‑酶法生产L‑草铵膦的方法，所述方法为：以外消旋N‑乙酰草铵膦为底物，以含羧肽酶基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体超声破碎后提取的纯酶为催化剂，以pH值为5～10的缓冲液为反应介质，在45℃水浴摇床200rpm条件下反应，反应完全后，获得含D‑N‑乙酰草铵膦和L‑草铵膦的反应液，将反应液分离纯化，收集D‑N‑乙酰草铵膦消旋化后用于循环拆分，同时获得L‑草铵膦。本发明方法不需要辅酶循环系统及与产物结构相似的氨基供体，反应步骤简单，易于分离，光学选择性高(ee值99％)，离子交换柱分离效果明显，更易得到高纯度的L‑草铵膦(纯度为98％)。