本发明公开了一种界面自组装羰基还原酶及在(R)‑3‑羟基‑3‑苯基丙酸乙酯合成中的应用，将羰基还原酶加入Tirs‑HCl缓冲液中，再加入聚苯乙烯的甲苯溶液，在黑暗、40～100r/min、20～40℃条件下，于摇床中震荡反应1～4小时，离心，获得上层为有机相、中间层为界面自组装羰基还原酶、下层为水相的反应体系，取出中间层用甲苯和Tris‑HCl缓冲液洗涤，获得界面自组装羰基还原酶；本发明构建的界面自组装羰基还原酶在有机相和水两相界面具有较好的催化功能，能够将3‑羰基‑3‑苯基丙酸乙酯转化为(R)‑3‑羟基‑3‑苯基丙酸乙酯，(R)‑3‑羟基‑3‑苯基丙酸乙酯的对映体过剩值大于99％。
📄 2018106962728
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2018-06-29
本发明涉及生物技术领域，公开了一种羰基还原酶突变体及其在酶法合成手性醇中的应用。本发明通过将如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列进行第36位赖氨酸突变为天冬氨酸、苏氨酸、缬氨酸中的任意一种或/和第125位组氨酸突变为赖氨酸、丝氨酸、亮氨酸中的任意一种，或和第170位组氨酸突变为赖氨酸、半胱氨酸、亮氨酸中的任意一种的突变，使得到相较于野生型的活性具有不同程度的提升的羰基还原酶突变体，尤其是单点突变体Mut‑T75K、Mut‑T75D、Mut‑E216M以及组合突变体Mut‑T75K‑E216M，具有优异的相对酶活、热稳定性及对底物的耐受性，且针对多种手性醇都具有较高的活性与稳定性，具有催化活性高、热稳定性高、底物耐受性强、易于发酵等优点。
📄 2025104376290
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2025-04-09
本发明公开了一种醇脱氢酶突变体及其在生物无机胺化中的应用，所述醇脱氢酶突变体是将SEQ ID No.2所示的醇脱氢酶氨基酸序列中第73位、第107位、第175位、第96位或第286位进行单突变或多突变获得的。本发明提供的醇脱氢酶突变体能够高效地为氧化还原体系不断提供NADH，保证生物无机胺化过程中的高效辅酶供应，使无机胺化合成成本降低；本发明的醇脱氢酶突变体对NAD+的催化效率显著高于野生型，酶活提升2倍，将其用于辅酶再生系统与草铵膦脱氢酶偶联应用于草铵膦生产的时间被有效缩短，具有很好的应用前景。
📄 2022111096568
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2022-09-13
本发明涉及一种L‑泛解酸内酯脱氢酶突变体、编码基因，含有编码基因的载体、基因工程菌，以及其在微生物催化制备酮基泛解酸内酯/D‑泛解酸内酯中的应用。所述L‑泛解酸内酯脱氢酶突变体，由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第156位、第224位、第164位进行单突变或多点联合突变获得。本发明构建的RhoLPLDH突变体菌株的比酶活较对照组提升显著，RhoLPLDH突变体与分子伴侣pGro7共表达进一步提高蓝了目的蛋白可溶性表达。本发明构建的RhoLPLDH突变体和pGro7共表达工程菌相较于出发菌株的比细胞活力也有显著提升。突变体特异性催化LPL，30小时底物转化率可达到94％，突变体在催化D,L‑PL底物时，48小时转化率可达到91.8％。突变体和共表达共轭聚酮还原酶和葡萄糖脱氢酶的工程菌采用“双菌一锅法”催化D,L‑PL拆分制备DPL时，DPL收率可达到92.7％。
📄 2023100889467
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2023-01-16
本发明公开了一种醇脱氢酶突变体及其在合成糠醇中的应用，所述的醇脱氢酶突变体氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示。YahK‑Y114W突变体提高了对辅酶NADH的偏好性使其催化糠醛的效率可达到野生型使用辅酶NADPH的水平。以表达突变体YahK‑Y114W的湿菌体为生物催化剂，以500mM糠醛作为底物，以500mM的葡萄糖做为辅底物，以葡萄糖脱氢酶为辅助酶，以NADH作为辅酶构建反应体系，在30℃、600rpm条件下反应6h，糠醇得率可达到76.04％，与野生型酶相比，得率提高了12.59％，成功改变醇脱氢酶对辅酶的偏好性，大幅度提高催化活力。
📄 2023111046031
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2023-08-30
本发明公开了一种类固醇脱氢酶突变体及其在制备甾体类药物中的应用，本发明通过筛选类固醇脱氢酶突变体提高酶活，由原来的54.3U/mg湿菌体提升至67.7U/mg湿菌体。本发明将类固醇脱氢酶突变体与过氧化氢酶通过连接肽连接构成融合蛋白后表达用于催化AD制备ADD，不仅提高了底物转化率，底物转化率高达98.6％，而且解决了反应过程中过氧化氢对湿菌体细胞的毒害问题，降低生产成本，具有良好的工业应用前景。
📄 2025100563688
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2025-01-14
本发明公开了一种热稳定性提高的羟基类固醇脱氢酶突变体、筛选方法及应用，本发明基于一株羟基类固醇脱氢酶结构预测和PROSS等计算机辅助设计技术迅速鉴定出与热稳定性相关的关键热点氨基酸残基，从而构建有限的定点突变体文库，进一步筛选获得优势突变体。所获得突变体的半失活温度(T5105)相对突变前提高了1.0‑7.7℃，其中突变体A126I和A132H的半失活温度(T5105)分别提高了7.7℃和3.7℃。且突变体的相对酶活达到突变前的99.86‑136.73％。本发明为快速提高酶的热稳定性提供了新方法，为羟基类固醇脱氢酶在工业中的应用奠定了基础。
📄 2025104382893
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2025-04-09
本发明公开了一种298位突变的醛酮还原酶突变体及其应用，属于蛋白质工程领域。本发明通过同源建模、分子比对和分子对接，提供了醛酮还原酶突变体，将序列表中氨基酸序列2所示的第298位酪氨酸突变为组氨酸SceCPRY298H或第158位丝氨酸和第298位酪氨酸同时分别突变为丙氨酸和组氨酸SceCPRS158A/Y298H，获得酶活力提高的醛酮还原酶突变体。SceCPR、SceCPRY298H、SceCPRS158A/Y298H的比酶活分别为32.62U/mg、216.6U/mg、400.1U/mg，SceCPRY298H、SceCPRS158A/Y298H比酶活分别提高了6.64、12.26倍。
📄 2022105222760
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2022-05-13
本发明公开了一种羰基还原酶LsCR突变体、工程菌及在不对称还原羰基化合物制备手性醇中的应用，所述羰基还原酶LsCR突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第101、117、147、145位进行单突变或多突变获得的。本发明LsCRM3突变体比活性与野生型LsCR相比提高了4.6倍，底物转化率大于99％，产物e.e.值始终保持在99.5％以上，时空产率达到809g/L/d，S/C为40g/g；突变体LsCRM4比活性与野生型LsCR相比增加了9倍，底物转化率大于99％，产物e.e.值始终保持在99.5％以上，时空产率达到1004g/L/d，S/C为600g/g。稳定性均有提高，具有工业应用的前景。
📄 2022107302276
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2022-06-24
本发明公开了一种酿酒酵母来源的醛酮还原酶SceCPR半理性设计及其生物催化应用，属于蛋白质工程领域。本发明通过同源建模、分子比对和分子对接，提供了醛酮还原酶突变体，将序列表中氨基酸序列2所示的第158位丝氨酸突变为丙氨酸SceCPRS158A，获得酶活力提高的醛酮还原酶突变体。SceCPR、SceCPRS158A的比酶活分别为32.62U/mg、119.4U/mg，SceCPRS158A比酶活提高了3.66倍。
📄 2022105222652
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2022-05-13
本发明公开了一种羰基还原酶突变体及其不对称合成双手性化合物的应用，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示野生型羰基还原酶KmCR‑WT氨基酸序列第100位进行单突变获得的。本发明突变体A100S活力较野生型提高了0.8倍，且具有严格的S‑构型立体选择性。对其他本发明所述的脂肪族酮化合物，催化活力均有提升，其中对异丁酰乙酸乙酯、丁酰乙酸乙酯的酶活高于目前报道的文献水平。
📄 2021107820798
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2021-07-09
本发明公开了一种马克斯克鲁维酵母醛酮还原酶KmAKR的突变体及其应用，所述醛酮还原酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第63位点进行定点饱和突变获得的。本发明构建的醛酮还原酶突变体M5‑A、M5‑L、M5‑M的比酶活较对照组醛酮还原酶分别增加了1.1倍、3.2倍、4.1倍。其中突变体KmAKR‑Y296W/W297H/K29H/Y28A/T63M对6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯、6‑氯‑(5S)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯等具有显著改善的催化活性。最大底物6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯投料量可达到450g/L，底物转化率高于99％，产物dep值始终保持在99.5％以上，生物催化过程的时空产率高达1224.3g/L d。
📄 2019109325020
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2019-09-29
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