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本发明公开了一种β‑半乳糖苷酶的突变体及其在牛奶中的应用，属于基因工程技术领域以及酶工程技术领域。本发明通过将来源于Aspergillus oryzae的β‑半乳糖苷酶第132位氨基酸突变为苯丙氨酸构建得到Y132F突变株，使得最适pH提升至5.5、受到产物抑制的程度低于野生型，并具有更好的乳糖水解效果，适于在食品加工等领域的应用。

本发明提供一种定点突变改造热稳定性提高的琼胶酶突变体，属于基因工程与酶工程领域。本发明突变体是在SEQ ID NO.2所示的β‑琼胶酶rAgaZC‑1的氨基酸基础上，将第602位天冬氨酸突变为甘氨酸（D602G），突变体D602G核苷酸序列及对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。D602G的催化效率较于rAgaZC‑1有17.6%的提高。热失活动力学和水解动力学分析表明，D602G的热稳定性明显提高，T5010提高1.5℃，41℃下的半衰期t1/2延长3倍，且在43℃下可以积累更多的琼胶寡糖，提高了琼胶酶在降解琼脂糖制备琼胶寡糖上的应用潜力。