本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种高催化活性的多聚磷酸激酶突变体及其在合成谷胱甘肽中的应用。本发明提供了一种高催化活性的多聚磷酸激酶突变体，其特征在于：所述多聚磷酸激酶突变体是将SEQ ID NO:2所示氨基酸序列突变为下列之一：（1）将SEQ ID NO:2所示氨基酸序列第234位进行单突变；（2）将SEQ ID NO:2所示氨基酸序列第234位和第166位进行双突变；其中，编码所述SEQ ID NO:2所示氨基酸序列编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1。本发明提供的单位点突变多聚磷酸激酶突变体chPPK‑N234A以及双位点突变多聚磷酸激酶突变体chPPK‑N234A/K166D具有高活性，相较于野生型多聚磷酸激酶酶活分别提高了4.19倍和6.12倍。
📄 2024113519176
📂 C12N9_12
👤 浙江工业大学
📅 2024-09-26
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种多聚磷酸激酶突变体及其在合成β‑烟酰胺单核苷酸中的应用，所述多聚磷酸激酶突变体由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多聚磷酸酶的第99位、第186位、第190位、第204位氨基酸进行单点或多点突变得到。本发明对来源于Lampropedia Hyalina DSM 16112的多聚磷酸激酶进行分子改造，得到了多种突变体，这些突变体的酶活较野生型多聚磷酸激酶提升了1.5～14倍，对AMP的偏好性较野生型多聚磷酸激酶提升1.08‑4.88倍，以此构建的ATP再生体系能显著降低酶的使用量，降低发酵容量和成本；且能极大缩短反应时间，降低AMP对酶活的影响，能够满足采用生物酶法制备NMN的大规模工业化生产的需求，具有广泛的应用前景。
📄 2025101019357
📂 C12N9_12
👤 浙江工业大学
📅 2025-01-22
本发明公开了一种热稳定性提升的多聚磷酸激酶突变体及应用，所述多聚磷酸激酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第59、68、190氨基酸进行单突变或多突变获得的。本发明多聚磷酸激酶突变体的热稳定性得到有效提升，能够保持更久的催化活性，相较于野生型的半衰期提升了2‑5倍，35℃下半衰期可达53h以上。本发明多聚磷酸激酶突变体在催化ATP合成中，反应2h，多聚磷酸激酶突变体Q59R/D68H/T190Y的ADP转化率可达80.57％。本发明有效提升了多聚磷酸激酶的热稳定性，有助于降低直接使用ATP的工业化生产成本，在依赖ATP循环系统的工业化生产中具有良好的应用前景。
📄 2025100924046
📂 C12N9_12
👤 浙江工业大学
📅 2025-01-21
本发明提供了一种过量表达FAD合成酶的基因工程菌其应用。所述的工程菌是将FAD合成酶的编码基因导入大肠埃希氏杆菌构建获得的。利用重组大肠杆菌表达FAD合成酶，经蛋白纯化后，可进行体外FAD合成；该FAD合成酶温度适用性较广，在20℃到50℃都能起作用；运用FAD合成酶体外合成FAD，初步研究发现每毫克FAD合成酶每分钟最高可转化合成3.271μM的FAD。与现有方法相比，本发明合成FAD的方法具有产物浓度高、杂质少，容易纯化及其工艺要求简单、环境友好等优点。
📄 2018107039335
📂 C12N9_12
👤 浙江工业大学
📅 2018-06-30
本发明涉及一种NADH激酶突变体及其编码基因，以及其在多酶偶联法生物合成L‑草铵膦、D‑氨基酸和L‑氨基丁酸中的应用。所述突变体为SEQ ID No.1所示的NADH激酶经下列之一的突变所得：(1)第175位苏氨酸T突变为组氨酸H；(2)第175位苏氨酸T突变为组氨酸H、第252位精氨酸R突变为丙氨酸A；(3)第175位苏氨酸T突变为组氨酸H、第252位精氨酸R突变为丙氨酸A、第332位异亮氨酸I突变为赖氨酸K。本发明NADH激酶突变体具有更好的催化效率，以中间产物PPO为底物进行催化反应时，转化率远高于原始酶，L‑草铵膦产率也大幅提升，克服了化学法合成L‑PPT所具有的工艺步骤多、反应条件苛刻、手性原料昂贵等缺点，是一种高效、低成本且环境友好的生产方式。
📄 2021112698688
📂 C12N9_12
👤 浙江工业大学
📅 2021-10-29
本发明公开了一种多聚磷酸激酶突变体、工程菌及其应用，所述多聚磷酸激酶突变体是将SEQ ID NO：2所示氨基酸序列第79位、第106位、第108位、第111位或第285位进行单突变或多突变获得的。本发明提供了多种来源于Cytophaga hutchinsonii的多聚磷酸激酶突变体，这些突变体的比酶活较母本多聚磷酸激酶提升2.7‑17.9倍，这些突变体构成的ATP再生体系能减少70％以上ATP依赖的生物催化合成反应中ATP的消耗，具有广泛的工业应用前景。
📄 2022101040759
📂 C12N9_12
👤 浙江工业大学
📅 2022-01-28
本发明公开了一种多聚磷酸激酶突变体及其在催化合成谷胱甘肽中的应用，所述突变体是将SEQ ID NO:2所示氨基酸序列第22位进行突变获得的。本发明提供了Cytophaga hutchinsonii来源的多聚磷酸激酶突变体，相较于改造前催化活性提升了2倍，其构成的ATP再生体系可以用于谷胱甘肽合成反应，在2h内产生超过19g的谷胱甘肽，产物生成率近90％。
📄 202410893736X
📂 C12N9_12
👤 浙江工业大学
📅 2024-07-04
本申请属于生物技术领域，具体涉及一种NAD激酶突变体、固定化酶及其应用。本申请提供了一种NAD激酶突变体，该突变体能够高效利用多聚磷酸(poly(P))衍生物代替辅酶ATP作为磷酰基供体，提高NADP的合成效率，减少产物中ATP残留，有利于简化产物分离纯化工艺，降低工业规模制备成本。本申请采用树脂为载体，含所述码基因的工程菌经发酵培养获得的粗酶液为活性组分制备获得NAD激酶编固定化酶，该方法制备的固定化NAD激酶连续使用10个批次仍能达到90%以上的转化率，具有良好的工业应用潜力。
📄 2025103644530
📂 C12N9_12
👤 浙江工业大学
📅 2025-03-26
本发明涉及一种烟酰胺核糖激酶突变体、编码基因，含有编码基因的载体、基因工程菌及应用。本发明针对野生型NrK，通过大分子建模技术模拟NrK的三维结构，利用能量最低原理和分子对接技术预测出可能的与催化相关的一个或多个位点。本发明构建的烟酰胺核糖激酶突变体与野生型酶相比，酶活力提高了1.26～2.98倍，能显著降低酶的使用量，降低发酵容量和成本；且能极大缩短反应时间，提高NMN收率，能够满足采用生物酶法制备NMN的大规模工业化生产的需求，具有广泛的应用前景。
📄 2022110047865
📂 C12N9_12
👤 浙江工业大学
📅 2022-08-22
本发明公开了一种捕蝇草ADP‑葡萄糖焦磷酸化酶在柑橘小实蝇防控方面的应用，该蛋白作为全新的生物杀虫资源，具有不同于已有杀虫剂的作用方式，对拓展具有生物活性的新型杀虫基因资源，降低现有化学杀虫剂使用导致的各类安全风险，减少田间化学农药的用量具有重要的科学及现实意义。
📄 2024112271031
📂 C12N9_12
👤 西南大学
📅 2024-09-03
本发明公开了CIPK6蛋白激酶在调控植物角果长度中的应用，CIPK6基因在在各个组织中都有表达，但在角果及花中表达量最高，在种子中表达量最低；定位于细胞质膜及细胞核中，研究发现在植物中过表达CIPK6蛋白激酶编码基因使角果变短，CIPK6突变植株能使角果变长，因此可将CIPK6蛋白激酶用于调控植物角果长度，将植物中突变或干扰CIPK6蛋白激酶编码基因使CIPK6蛋白激酶无活性或活性降低获得角果变长的植物，对提高农作物产量具有重要意义。
📄 2021110625381
📂 C12N9_12
👤 西南大学
📅 2021-09-10
本申请提供了一种CsMEK5基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用，所述CsMEK5基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述CsMEK5基因的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明CsMEK5基因及其编码蛋白在提高柑橘溃疡病抗性的应用，通过克隆柑橘CsMEK5基因编码序列，进行超量表达载体构建，然后转化柑橘，得到的转基因植株溃疡病病斑面积和病情指数与野生型相比最大下降率为63％和64％，能够显著的减轻溃疡病的发病程度，减小病斑面积，通过超量表达CsMEK5基因可大大提高植株对细菌性溃疡病的抗性，这对于柑橘的抗细菌性溃疡病育种具有重大的应用价值。
📄 2023118047853
📂 C12N9_12
👤 西南大学
📅 2023-12-26
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