本发明公开了一种共轭聚酮还原酶突变体,是将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列第64或206位点进行单点突变或多点联合突变获得。共轭聚酮还原酶的突变体比酶活相较于野生型可提高25%以上。并提供了其编码基因,含有编码基因的重组载体以及共表达工程菌和应用。以该共轭聚酮还原酶其突变体与葡萄糖脱氢酶和L‑泛解酸内酯脱氢酶构建三酶共表达工程菌作为生物催化剂,催化外消旋泛解酸内酯合成光学纯D‑泛解酸内酯,提高了多酶级联反应的催化效率,降低中间产物KPL的水解损失,显著提高了DPL的收率,所得DPL产率可高达98%,光学纯度可达99.9%。