本发明公开了一种寨卡病毒核酸检测试剂盒和检测方法,所述检测试剂盒包括PfAgo蛋白、序列如SEQ ID NO.1~3所示的gDNAs以及序列如SEQ ID NO.4所示的分子信标。本发明建立了一种新型的核酸检测系统,该系统基于PfAgo介导的核酸检测,靶向寨卡病毒基因组的非结构蛋白5区域。本发明方法在PCR预扩增的情况下,MDC约为10nM;而引入扩增步骤后,MDC可大幅降至8.3aM;此外,ZIKV‑PAND临床模拟样本的诊断结果显示与qRT‑PCR检测的一致性达到100%,这将有助于ZIKV感染的临床诊断和流行病学调查的分子检测。