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本发明公开了一种反式茴香脑加氧酶突变体的高通量筛选方法及突变菌株和突变体，包括以反式茴香脑加氧酶基因为模板，进行易错PCR，获得反式茴香脑加氧酶突变体文库；将所述反式茴香脑加氧酶反应底物添加入含有反式茴香脑加氧酶突变体的溶液中进行催化反应，将反应液与2,4‑二硝基苯肼进行显色反应，并加入碱溶液及有机溶剂反应，测定吸光度。本发明通过易错PCR构建突变库，并建立以2,4‑二硝基苯肼为显色剂，酶标仪测定OD470为基础的高通量筛选方式，筛选合成洋茉莉醛重组菌株的突变菌株，该方式具有高效、精准、快速的优势，突变株LSQ‑3对于合成洋茉莉醛、对茴香醛以及香兰素的催化效率均显著提高，具有良好的应用价值。