本发明公开了一种酪氨酸酚裂解酶高活力菌株的高通量筛选方法,所述方法为:将待测菌株经发酵培养获得的湿菌体作为待测菌株样品加入底物反应液中,摇床反应液离心,获得上清液;取上清液加入显色反应液中,室温静置显色,在465nm处测吸光值,根据丙酮酸钠标准曲线,获得上清液中丙酮酸钠的含量,进而获得待测菌株样品中酪氨酸酚裂解酶的活力,从而筛选出酪氨酸酚裂解酶高活力菌株;本发明方法,可以直接高通量筛选获得对左旋多巴合成能力提高的酪氨酸酚裂解酶及其突变体,时间从分析一个样品需要20min,缩短到分析近60个样只需1min,所测得的酶活误差控制在3%以内。
📄 2018102713603
📂 C12Q1_527
👤 浙江工业大学
📅 2018-03-29
本发明公开了一种双荧光法筛选β‑丙氨酸合成酶的方法,将荧光报告基因与β‑丙氨酸合成酶基因共同导入宿主菌中,接种含阿拉伯糖的基本盐培养基,在30~37℃诱导培养后,获得发酵液;取发酵液冻融破胞,取破胞液即为粗酶液;取粗酶液加入L‑天冬氨酸,于37℃条件下静置2h进行转化反应将底物转化为β‑丙氨酸,取转化液在吸收波长355nm和发射波长445nm的条件下测定荧光值;取发酵液在吸收波长395nm和发射波长509nm的条件下测定荧光值,筛选获得高活力β‑丙氨酸合成酶;本发明体系操作简便、酶活测量稳定、酶活检测灵敏度高等优点,在β‑丙氨酸合成酶定向改造方面具重要的应用价值。
📄 2019100710130
📂 C12Q1_527
👤 浙江工业大学
📅 2019-01-25