本发明公开鉴别杜仲性别的引物、片段及方法,所述片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述引物对的核苷酸序列从5’‑3’如SEQ ID NO.2~3所示。本发明提供了一种新的用于杜仲苗期识别其性别的片段MSL4,其长度为479bp;所述MSL4在杜仲两个独立群体中均被发现,表明杜仲的性别可能是由基因决定的,且这个雄性特异性位点似乎暗示其在性染色体上的位置,这表明杜仲可能有一个XX/XY性别决定系统。本发明还提供了用于快速识别杜仲苗期性别的相关PCR引物对及鉴别方法,所述方法简单、快速,对杜仲性别的识别具有重要的应用前景,对缩短杜仲的育种周期、加快其杜仲胶商业生产有重要价值。