本发明公开了一种转氨酶、突变体及其生产L‑草铵膦的应用,所述突变体是将SEQ ID NO:2所示氨基酸第62位的异亮氨酸取代为缬氨酸、第74位的丝氨酸取代为苏氨酸、第93位的甲硫氨酸取代为异亮氨酸、第167位的酪氨酸取代为苯丙氨酸、第220位的丙氨酸取代为脯氨酸、第282位的精氨酸取代为赖氨酸、第353位的丙氨酸取代为丝氨酸、第355的异亮氨酸取代为缬氨酸。转氨酶以4‑(甲基羟基磷酰基)‑2‑羰基‑丁酸为底物制备L‑草铵膦,产物ee>99.9%,4h底物转化率为56.31%。转氨酶突变体产物ee>99.9%,4h底物转化率为95.42%。