本发明涉及一种L‑泛解酸内酯脱氢酶及突变体、编码基因,含有编码基因的载体、基因工程菌,以及其在微生物催化制备酮基泛解酸内酯/D‑泛解酸内酯中的应用。所述L‑泛解酸内酯脱氢酶源自Rhodococcus hoagii,氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示,其经密码子优化后核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明有益效果主要体现在:本发明转化所需的三种酶可在一种重组菌中同时高效表达,所述重组菌可大量培养,不需经过细胞破碎、冷冻干燥等处理过程,成本较低且操作简便,可建立一个高效、低成本、易于工业化放大生产的生物酶法合成工艺。本发明将中间产物酮泛解酸内酯KPL转化为DPL的过程中利用辅酶再生体系,通过将NADP+转化为NADPH,使得NADPH在体系中浓度相对稳定,转化能够高效进行。本方法具有专一性强、产物光学纯度高、有效控制KPL水解等优点,采用本方法制备DPL,添加LPL 200mM,36小时转化率达96.4%且没有KPL水解。