本发明公开一种产物耐受型腈水解酶突变体及其应用,所述突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第29位,第145位氨基酸中的一位或多位进行突变获得的。腈水解酶突变体AcN‑S29A/N145D的比酶活提高了1.36倍,最适催化温度从50℃提高到了55℃,且55℃下半衰期达到了37.3h,较原来提高了1.71倍;同时产物耐受性及耐酸性显著提高,可减小高产物浓度和产物生成导致反应体系pH下降的影响,能直接以水作为反应介质进行催化反应,底物转化率显著提高,10g/L湿细胞催化剂在35℃下水解1M底物7h可完全转化,最终转化率达到99%以上,具有更好的工业应用前景。