本发明公开了一种腈水解酶突变体、工程菌及其在合成(R)‑3‑氰基己酸中的应用，所述腈水解酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第135位、第199位、第59位进行单突变或多突变获得的。本发明通过定向进化技术提升腈水解酶活性及立体选择性构建了腈水解酶突变体，与亲本腈水解酶PgNITmut相比，突变体PgNITmut/F135L对底物3‑氰基己腈的对映体选择率(E值)由332提升至419；突变体PgNITmut/F135L/R199W活力提升1.36倍，E值提升至461；突变体PgNITmut/F135L/R199W/T59D活力提升2.05倍，E值提升至569。本发明腈水解酶突变体具有较高的活性及立体选择性，利用高效腈水解酶法合成布瓦西坦手性中间体(R)‑3‑氰基己酸，大幅度降低工业化生产成本，在布瓦西坦工业化生产中具有良好的应用前景。
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