发明涉及基因工程领域，具体涉及谷氨酸棒状杆菌来源的酮泛解酸羟甲基转移酶突变体及其编码基因及其在制备酮泛解酸和D‑泛酸中的应用。本发明通过借助计算机模拟技术，对底物通道及活性口袋周围关键氨基酸位点进行预测和突变，得到了一系列突变体。所述对酮泛解酸羟甲基转移酶突变体是是将SEQ ID NO:1所示氨基酸序列第18位、第20位、第21位、第24位、第25位、第26位、第27位、第49位进行定点突变获得的。最终得到的酮泛解酸羟甲基转移酶突变体中有酶活显著改变的突变体，该突变体相比于野生型酶在催化α‑酮异戊酸产生酮泛解酸时催化活力和底物耐受性大大提高。
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