本发明公开了一种腈水解酶突变体及在普瑞巴林手性中间体合成中的应用，属于生物工程技术领域。本发明以芜菁/高山南芥腈水解酶嵌合体BaNIT的三突变体BaNITmut为亲本，运用定点突变对127位点和260位点进行改造，所获得的腈水解酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.8。相比于亲本腈水解酶，本发明提供的腈水酶突变体催化外消旋异丁基丁二腈的活力及温度稳定性分别有所提高；同时副产物(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酰胺含量减少；操作易于控制，生产成本低，产品光学纯度高，在高效催化异丁基丁二腈合成(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸中具有良好的应用前景。
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