本发明涉及一种L‑泛解酸内酯脱氢酶突变体、编码基因,含有编码基因的载体、基因工程菌,以及其在微生物催化制备D‑泛解酸内酯中的应用,所述突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第第28位进行饱和突变获得。本发明构建的RopLPLDH突变体工程菌RopLPLDHA28S及其分子伴侣共表达工程菌RopLPLDHA28S/pGro7的比酶活较对照组RopLPLDH分别提高了0.45倍和0.50倍。RopLPLDH突变体与分子伴侣共表达策略显著提高目的蛋白可溶性表达。其中共表达菌株RopLPLDHA28S/pGro7基本能够完全催化500mM和750mM L‑泛解酸内酯。三酶共表达工程菌pA‑CglCPR/EsGDH‑pET‑RopLPLDH催化200mM底物时,产物L‑泛解酸内酯浓度随时间的推移而逐渐升高,24h时底物转化率达到95.6%。