本发明公开了一种核苷水解酶突变体、工程菌及应用,所述突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第12位、190位氨基酸进行单突变或双突变获得的。本发明核苷水解酶突变体NH‑S12P、NH‑S190V酶活力达到1030U/mg、1197U/mg,相较于野生型核苷水解酶比活力提高了18.8%、38%,且两种突变体在65℃的热稳定性相较于野生型核苷水解酶分别提高了8倍和10倍。核苷水解酶热稳定性的提高有助于减少生产、运输、应用、存贮过程中酶的热失活率。这对酶法水解核苷制备嘌呤的工业化生产效率提高具有重要意义。