摘要
本发明涉及一种脂肪酶的原核表达及应用和固定化方法,属于酶工程及分子生物学应用领域;该脂肪酶Tm1350基因来源于极端嗜热菌,本发明将该基因构建到原核表达载体pET‑28a中,获得重组质粒pET‑28a‑Tm1350,转入宿主细胞E.coli BL 21,诱导重组脂肪酶的表达,然后纯化并鉴定其酶学性质;通过构建高拷贝数的穿梭表达载体pHS‑CotB‑Tm1350,转入枯草芽孢杆菌菌株DB403中,诱导重组孢子产生,随衣壳蛋白CotB的组装,该酶共表达在孢子表面。本发明首次通过孢子表面技术对脂肪酶固定化,该脂肪酶具有很好的热稳定性,耐碱性,甲醇激活性及耐甲醇性,具有很大的工业化应用潜能,如生物柴油的制备;该酶展示在孢子表面,不仅稳定性更好,而且通过简单离心或过滤就可回收利用,具有很好的应用前景。