一种脂肪酶的原核表达及应用和固定化方法

摘     要：本发明涉及一种脂肪酶的原核表达及应用和固定化方法，属于酶工程及分子生物学应用领域；该脂肪酶Tm1350基因来源于极端嗜热菌，本发明将该基因构建到原核表达载体pET‑28a中，获得重组质粒pET‑28a‑Tm1350，转入宿主细胞E.coli BL 21，诱导重组脂肪酶的表达，然后纯化并鉴定其酶学性质；通过构建高拷贝数的穿梭表达载体pHS‑CotB‑Tm1350，转入枯草芽孢杆菌菌株DB403中，诱导重组孢子产生，随衣壳蛋白CotB的组装，该酶共表达在孢子表面。本发明首次通过孢子表面技术对脂肪酶固定化，该脂肪酶具有很好的热稳定性，耐碱性，甲醇激活性及耐甲醇性，具有很大的工业化应用潜能，如生物柴油的制备；该酶展示在孢子表面，不仅稳定性更好，而且通过简单离心或过滤就可回收利用，具有很好的应用前景。

著 录 项： 

• 1． 买家选定所需专利，确认国家手续办理方，下单，确认交易合同；
  2． 卖家确认专利可交易；
  3． 买家支付交易款项到平台；
  4． 买卖双方签订《专利转让委托书》、《转让协议》、《解除代理委托书》各一式两份并提交给办理国家手续方；
  5． 办理国家手续方提交办理官方手续，国家知识产权局1个月左右下发《著录项目变更手续合格通知书》；
  6． 买家确认收到《专利证书》、《著录项目变更手续合格通知书》；
  7． 平台把交易款项支付给卖家，至此专利转让合同完成。
  

• 交易方	企业	个人
  买家	营业执照副本复印件（需盖公章）	身份证复印件（签字）
  	专利转让委托书（需盖公章）一式两份	专利转让委托书（需签字）一式两份
  	专利转让协议（需盖公章）一式两份	专利转让协议（需签字）一式两份
  卖家	营业执照副本复印件（需盖公章）	身份证复印件（需申请人签字）
  	解除代理委托书（需盖公章）一式两份（如专利通过代理机构申请）	解除代理委托书（需签字）一式两份（如专利通过代理机构申请）
  	专利转让协议（需盖公章）一式两份	专利转让协议（需签字）一式两份
  	专利请求书或手续合格通知书、授权通知书复印件	专利请求书或手续合格通知书、专利授权通知书复印件
  	专利证原件（若授权下证）	专利证原件（若授权下证）

• 日期	法律信息	备注
  2017/11/17	授权
  2015/07/01	实质审查的生效	IPC(主分类): C12N 15/70 专利申请号: 201510077614.4 申请日: 2015.02.13
  2015/06/03	公开