本公开提供了一种猫冠状病毒S蛋白mRNA的体外转录系统及其构建方法，包括如下步骤:对猫冠状病毒S蛋白mRNA序列进行修饰和优化；将设计好的S蛋白基因片段连接体外转录载体，构建pGEM‑S重组质粒，转入大肠杆菌大量培养，并提取质粒进行线性化处理及胶回收，以获得体外转录的DNA模板；通过体外转录反应获得FCoV S mRNA，并进行加帽及纯化。用同样的技术路线构建了pGEM‑EGFP载体，体外转录成EGFP mRNA；以EGFP mRNA作为报告基因进行细胞转染实验，并在体外转染多种细胞系以验证IVT‑mRNA系统。本发明人首次构建了猫冠状病毒S蛋白mRNA的体外转录系统，可以在细胞水平上高效表达目的蛋白，并可以在不同细胞系中应用，为后期制备猫冠状病毒mRNA疫苗提供了基础。
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