本发明属于生物催化领域，具体涉及一种突尼斯污水鞘杆菌(Defluviitoga tunisiensis)来源的D‑阿洛酮糖6‑磷酸磷酸酶突变体及应用。所述D‑阿洛酮糖6‑磷酸磷酸酶突变体，以氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的D‑阿洛酮糖6‑磷酸磷酸酶为模板，对其进行定点饱和突变得到；所述D‑阿洛酮糖6‑磷酸磷酸酶突变体的突变位点为下列之一或其中两种以上：(1)第160位的K突变为C；(2)第228位的S突变为A；(3)第48位的C突变为P。本发明提供的D‑阿洛酮糖6‑磷酸磷酸酶突变体在制备D‑阿洛酮糖时产率达到60％，产物中D‑阿洛酮糖与副产物果糖的比例由野生型的1:1提高到6:1。底物专一性调控后的磷酸酶突变体在体外多酶合成系统生产D‑阿洛酮糖中具有重要工业应用潜力。
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