本发明公开了一种腈水解酶突变体及其在水解吡啶腈衍生物中的应用,所述腈水解酶突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第59位、第134位、第135位或第192位氨基酸进行单突变或多突变获得的。本发明经过半理性设计,对蛋白质进行分子改造,其中腈水解酶四突变体AcNR‑W59A/T134G/H135L/S192G对4‑TCN的催化活性提升了约142倍,对蓖麻碱的催化活性提升了约77倍,同时保持了完全的水解活性。本发明报道的腈水解酶突变体对多种吡啶腈类物质拥有很高的催化活性,在农药和饲料生产中具有广泛而良好的应用前景。