本发明涉及一种新型耐高温D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶及突变体，及其在微生物催化D‑果糖异构化制备D‑阿洛酮糖(D‑psicose)中的应用。所属异构酶氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述异构酶突变体由SEQ ID NO.3所示氨基酸经定点突变而得，所述点突变位点为下列中的一个或多个：(1)第106位、(2)第183位、(3)第211位、(4)第276位。本发明有益效果主要体现在：本发明提供了一种全新的耐高温D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体，该突变体具有超高酶活和底物转化率，最适反应温度可达90℃。当底物浓度为700g/L，反应温度为85℃时，产物得率最高达67.14％。将重组酶进行固定化并连续催化300批次，转化率均大于67％。本发明解决了现有酶催化制备D‑psicose效率低下的难题，获得的优于文献报道的连续转化效果对提升D‑psicose工业化水平具有重要意义。
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