本发明公开了一种醛酮还原酶突变体及其在不对称还原6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯制备6‑氰基‑(3R,5R)‑二羟基己酸叔丁酯中的应用,所述醛酮还原酶突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸第125位、30位、212位、63位进行单突变或多突变获得的。本发明制备的醛酮还原酶突变体pKlAKR‑I125V‑S30P‑Q212R‑I63W的比酶活较母本醛酮还原酶提升了1.31倍,最大底物6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯投料达到80g/L,该醛酮还原酶突变体更具工业应用前景。