本发明公开了一种用于敲除猪RBM20基因部分保守序列的sgRNA组合、猪模型和构建方法,sgRNA组合包括第一sgRNA和第二sgRNA;第一sgRNA的DNA序列的正义链如SEQ ID No:1所示,反义链如SEQ ID No:2所示;第二sgRNA的DNA序列的正义链如SEQ ID No:21所示,反义链如SEQ ID No:22所示。本发明选用具有高打靶效率的sgRNAR6和sgRNAR10实现从PFFs中高效敲除RBM20基因第9外显子,并通过体细胞核移植和胚胎移植技术成功获得RBM20第9外显子敲除猪,为肌肉系统疾病或肌肉损伤、衰老等机制的研究提供了新的动物模型和更多的生物材料选择。