摘要
一种高效表达多拷贝人表皮生长因子的方法,通过在其基因片段的上游及下游引入限制酶酶切位点,经酶切、连接,得到人表皮生长因子成熟肽基因的串联重复序列,克服人表皮生长因子分子量小,表达量不够的问题,同时在人表皮生长因子基因片段的上游引入kex2酶切位点,在下游修改部分核苷酸碱基使原氨基酸序列羧基端ELR变为酵母菌kex2酶切位点,以保证重组表达的目的蛋白经由酵母固有的kex2酶切割为单体,显著提高表达量,并具有天然的N末端,C端只有一个氨基酸残基的差异却没有冗余氨基酸,而活性却没改变,因其在毕赤酵母中自然合成,可以保持蛋白质原有的天然状态的空间构象,进而实现了人表皮生长因子的高效规模化制备。