本发明公开了一种3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体、编码基因、载体及应用，属于酶工程技术领域。本发明的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体，由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体的第214位和/或第499位经定点突变获得。本发明通过多序列氨基酸比对，进行定点突变，提高了3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的催化效率，进一步提高了3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶产量。本发明构建的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的重组大肠杆菌可将3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶酶活较出发菌株提高1.5倍，改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
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