本发明公开了一种用于检测非洲猪瘟病毒的重组抗原蛋白及其制备方法、检测试剂盒和应用。所述重组抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。所述制备方法包括：S10、将如SEQ ID No:2所示的编码基因克隆至载体上，构建形成重组表达质粒；S20、将得到的重组表达质粒转化感受态细胞后，经培养纯化，得到重组抗原蛋白；其中，所述载体为pET28a载体，所述感受态细胞为大肠杆菌。所述检测试剂盒包括ELISA反应液和包被有上述所述的重组抗原蛋白的抗体检测板。通过上述技术方案，达到了表达量高，特异性强，亲和力高，与其它相近的猪病毒感染血清无交叉反应，能够特异性地快速实现对非洲猪瘟病毒病毒的检测效果。
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