本发明提供了一种牛赤羽病病毒重组N蛋白抗原及制备方法和ELISA试剂盒,涉及生物技术检测领域,解决了现有技术中的ELISA检测方法一般采用的是竞争性ELISA技术手段,其制备成本较高,商品化试剂盒的价格也比较昂贵,对我国肉牛养殖企业发展不利的技术问题。所述牛赤羽病病毒重组N蛋白抗原,其氨基酸序列为SEQ ID No.2所示。本发明中获得的牛赤羽病病毒重组N蛋白抗原,经验证可与牛赤羽病病毒的抗体特异性结合,可作为牛赤羽病病毒检测的候选抗原;本发明研制的ELISA检测试剂盒可用于牛赤羽病病毒抗体的检测,具有特异性强、灵敏度高、重复性好、成本低廉,可大批量检测等优点。