本发明公开了一种非洲猪瘟病毒检测用重组抗原蛋白及其制备方法、检测试剂盒和应用。所述重组抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。所述制备方法包括:将如SEQ ID No:2所示的编码基因克隆入原核表达载体后,转化感受态细胞,诱导表达转化后的所述感受态细胞,获得所述重组抗原蛋白;其中,所述原核表达载体为pET28a(+)载体,所述感受态细胞为大肠杆菌。所述试剂盒包括ELISA反应液和抗体检测板,且所述抗体检测板上包被有上述所述的重组抗原蛋白。通过上述技术方案,达到了表达量高,特异性强,亲和力高,检测成本低,能够特异性地快速实现对非洲猪瘟病毒病毒的检测的效果。