本发明公开了一种利用表面活性剂制备高酯化活性脂肪酶的方法，属于酶工程技术领域。本发明通过脂肪酶水溶液中添加不同的表面活性剂及不同的表面活性剂浓度，通过冷冻干燥获得具有高酯化活性的脂肪酶，以满足脂肪酶非水相催化的需要。将不具有酯化活性或者活性较低的各种微生物脂肪酶，在合适浓度下与适当浓度的表面活性剂进行混合处理，可获得酯化活性显著提高的脂肪酶，同时脂肪酶常见的水解活性也发生变化。酯化活性的提高使脂肪酶更适合工业化应用。
📄 2017104259907
📂 C12N9_96
👤 江南大学
📅 2017-06-08
本发明公开了一种改变脂肪酶催化活性的活性重塑方法，属于酶工程技术领域。本发明通过脂肪酶体外重塑过程中添加不同的调节因子，获得具有高酯化活性的重构脂肪酶，以满足脂肪酶非水相催化的需要。将不具有酯化活性或者活性较低的各种微生物脂肪酶，包括大肠杆菌工程菌外源表达的脂肪酶以及商品脂肪酶，经8M尿素变性处理，在复性过程中添加从华根霉细胞提取的膜环境复合物WTS，可获得酯化活性显著提高的活性重塑脂肪酶，同时脂肪酶常见的水解活性也发生变化。酯化活性的恢复使脂肪酶更适合工业化应用。
📄 2016102619532
📂 C12N9_20
👤 江南大学
📅 2016-04-25
本发明公开了一种水解酶基因strB及其编码的蛋白质和应用。所述水解酶基因strB全长为987bp，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码产物水解酶StrB含328个氨基酸，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。StrB能催化降解溴氰菊酯、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、高效氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯、醚菌酯、吡唑醚菌酯和嘧菌酯等含有酯键的农药。生产的酶制剂可用于蔬菜、水果、烟草和茶叶等农产品中的农药残留去除，提高农产品品质及增加附加值。水解酶基因strB可进一步用于构建转基因作物彻底解决农业生产中农药残留超标问题，生产无公害绿色农产品；也可用于修复酯类农药污染的土壤、水体等自然环境，具有广阔的应用前景。
📄 2019108699820
📂 C12N15_55
👤 华南农业大学
📅 2019-09-12
本发明公开了一种腈水解酶突变体、工程菌及其在合成(R)‑3‑氰基己酸中的应用，所述腈水解酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第135位、第199位、第59位进行单突变或多突变获得的。本发明通过定向进化技术提升腈水解酶活性及立体选择性构建了腈水解酶突变体，与亲本腈水解酶PgNITmut相比，突变体PgNITmut/F135L对底物3‑氰基己腈的对映体选择率(E值)由332提升至419；突变体PgNITmut/F135L/R199W活力提升1.36倍，E值提升至461；突变体PgNITmut/F135L/R199W/T59D活力提升2.05倍，E值提升至569。本发明腈水解酶突变体具有较高的活性及立体选择性，利用高效腈水解酶法合成布瓦西坦手性中间体(R)‑3‑氰基己酸，大幅度降低工业化生产成本，在布瓦西坦工业化生产中具有良好的应用前景。
📄 2023102021266
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2023-02-23
本发明涉及一种α-转氨酶突变体及其在不对称合成L-草铵膦中的应用。所述突变体是将SEQ ID:1所示的氨基酸序列的第52、71、81、153、168、324、341和361位中的一个或者多个进行单位点突变或多位点突变获得的。本发明实现高转化率α-转氨酶突变体基因的高效表达，酶活最高为808.1U/mg。本发明中所述α-转氨酶突变体的最适反应温度最高达到67℃，在该温度下催化600mM草铵膦前体酮不对称合成L-草铵膦中，转化率高达100％，是文献报道的最高水平。该CkTA突变体解决了现有α-TA酶活低、底物耐受性差、转化率低的技术难题，具有较好应用前景。
📄 2019100321715
📂 C12N9_10
👤 浙江工业大学
📅 2019-01-14
本发明公开了一种米曲霉脂肪酶突变体及在拆分(R,S)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸酯制备(R)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸酯中的应用，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第38位或第230位进行定点饱和单突变或多突变获得的。本发明通过比较突变体酶AOL‑3F38N、AOL‑3F38N‑V230R和未突变酶AOL‑3的水解能力，结果发现突变体酶AOL‑3F38N、AOL‑3F38N‑V230R的水解活性是未突变脂肪酶的3.4倍和4.0倍，改造后的脂肪酶的热稳定性在50℃以后表现的更好，(R)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸酯产率提高，更加适合工业化生产。
📄 2019102834956
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2019-04-10
本发明公开了一种脂肪酶突变体及其在制备(S)‑2‑氯苯甘氨酸甲酯中的应用，该脂肪酶突变体由SEQ ID No.2所示氨基酸序列第157位的谷氨酰胺突变为苯丙氨酸，第189位的异亮氨酸突变为赖氨酸，且第154位的缬氨酸突变为天冬氨酸而获得。本发明通过分子对接和定点饱和突变，筛选获得了可明显缩短不对称水解反应时间且对R型2‑氯苯甘氨酸甲酯方拆分效率高、选择性高的脂肪酶突变体，该突变体在反应12h后(S)‑2‑氯苯甘氨酸甲酯的得率达到了72.81％，ee值为95.24％，相对于野生型来说，实现了活性的提高和选择性的反转，同时缩短了反应时间。
📄 2020100362224
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2020-01-14
本发明公开了一种印迹脂肪酶及其应用，所述印迹脂肪酶按如下方法制备：将印迹分子加入脂肪酶酶液中，搅拌溶解，调节pH为7.2‑7.8，搅拌印迹反应完全后，加入大孔树脂，搅拌吸附完全后，将反应液过滤，滤饼洗涤干燥，即获得印迹脂肪酶；本发明以麦芽糖或蔗糖为印迹分子，与有机酸和酯类化合物为印迹分子比较，印迹体系不需要表面活性剂与醇类助溶剂，印迹分子在水溶液中与脂肪酶分子的结合更优。麦芽糖印迹的脂肪酶，催化低聚糖酯化的应用面较广，以蔗糖为例，催化其乙酯合成，酯化率与酯化选择性均优于未印迹的脂肪酶，本发明酯化率高达86.6％，酯化选择性高达85.4％。
📄 2018113149756
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2018-11-06
本发明公开了一种南极假丝酵母脂肪酶B的固定化方法，所述方法将二甲基咪唑水溶液、硝酸锌水溶液与南极假丝酵母脂肪酶B混合，在25℃、200rpm磁力搅拌条件下反应30min，再加入非极性大孔吸附树脂和交联剂，在15-45℃、200rpm水浴条件下交联反应5h，真空抽滤机抽滤，滤饼干燥，获得固定化南极假丝酵母脂肪酶B；与市场上的现有商品固定化脂肪酶相比较，本发明制备的固定化脂肪酶有更高的酶活力，因此酶固定化方法具有良好的工业化应用前景。
📄 2019104405368
📂 C12N11_14
👤 浙江工业大学
📅 2019-05-24
本发明提供了一种米曲霉脂肪酶及在拆分制备布瓦西坦中间体的应用，所述米曲霉脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，以发酵培养获得的湿菌体经冷冻干燥后得到的干菌体为催化剂，外消旋2‑(2‑叔丁氧基‑2‑氧代乙基)戊酸甲酯为底物，以pH7.0磷酸缓冲溶液为反应介质，在20‑60℃、1000rpm条件下进行拆分制备布瓦西坦中间体R‑2‑(2‑叔丁氧基‑2‑氧代乙基)戊酸，质量收率达到49.5％，产物R‑2‑(2‑叔丁氧基‑2‑氧代乙基)戊酸经甲酯化后对映体过量值>99％。
📄 2019106059139
📂 C12N9_20
👤 浙江工业大学
📅 2019-07-05
本发明公开了一种腈水解酶突变体及其在制备1-氰基环己基乙酸中的应用，所述突变体是将SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第180位，第205位氨基酸中的一位或多位进行突变获得的。本发明经过半理性设计，对蛋白质进行分子改造，腈水解酶双突变体AcN-G180D/A205C的比酶活最高提高了1.6倍，转化率>99％，且利用含有腈水解酶突变体的重组大肠杆菌在高温下(50℃)水解1-氰基环己基乙腈，反应时间缩短为原来的四分之一。因此，本发明所获得的突变体在高效催化1-氰基环己基乙腈合成加巴喷丁中间体1-氰基环己基乙酸中具有良好的应用前景。
📄 2020101279277
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2020-02-28
本分案申请公开了一种热稳定性和活力提高的腈水解酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明以芜菁/高山南芥腈水解酶嵌合体BaNIT的三突变体BaNITmut为亲本，运用定点突变对127位点和260位点进行改造，所获得的腈水解酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.8所示。相比于亲本腈水解酶，本发明提供的腈水酶突变体催化外消旋异丁基丁二腈的活力及温度稳定性分别有所提高；同时副产物(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酰胺含量减少；操作易于控制，生产成本低，产品光学纯度高，在高效催化异丁基丁二腈合成(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸中具有良好的应用前景。
📄 2021112822473
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2020-01-13
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