本发明公开了一种草铵膦脱氢酶突变体及其应用，该草铵膦脱氢酶突变体由SEQ ID No.2所示氨基酸的第90位、第91位、第376位进行单突变或多突变获得；其中，第90位的赖氨酸突变为丝氨酸；第91位甘氨酸突变为丝氨酸或脯氨酸；第376位的丝氨酸突变为精氨酸。本发明利用定点饱和突变技术对SEQ ID No.1所示的草铵膦脱氢酶基因进行突变，发现第90位、第91位、第376位是影响酶活的关键位点，获得比酶活远高于母本草铵膦脱氢酶的突变体，其中，突变体lvPDH‑K90S‑G91P‑S376R的比酶活较母本草铵膦脱氢酶提升了8.4倍，具有工业应用前景。
📄 2018115856747
📂 C12N9_02
👤 浙江工业大学
📅 2018-12-25
本发明涉及一种草铵膦脱氢酶突变体及其编码基因，以及利用该突变体构建的基因工程菌菌及其在催化PPO制备L‑草铵膦中的应用。所述突变体氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，编码基因如SEQ ID No.2所示。本发明构建的基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pETDuet‑1‑PPTGDHE3(A164G‑V354A‑R205K)‑GDH，具有高产草铵膦脱氢酶的性质，用于发酵罐生产，最高酶活力可达6605U/L，可用于微生物催化PPO制备L‑草铵膦，大大节约了成本，具有十分重要的产业价值和显著的社会效益；含草铵膦脱氢酶的固定化全细胞用于催化PPO生产L‑草铵膦，重复使用20次后，固定化细胞仍能保持100％的转化率，具有良好的工业化应用前景。
📄 2021110220135
📂 C12N9_06
👤 浙江工业大学
📅 2021-09-01
本发明公开了双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体及其在催化合成L-草铵膦中的应用，该双辅酶依赖型草铵膦脱氢酶突变体，其特征在于，所述突变体由SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第91位、第111位、第240位和第261位进行多点突变后获得。本发明不仅改变了草铵膦脱氢酶突变体的辅酶依赖性，由原来NADPH依赖性改为NADH/NADPH双依赖性，而且也对草铵膦脱氢酶催化活性进行了改造，活力有了较大提升，并将突变体进一步组合，获得了高活力菌株，催化制备的L-草铵膦转化率高、收率高、产物易于分离提纯且显著缩短了反应进程。
📄 202010644394X
📂 C12N9_06
👤 浙江工业大学
📅 2020-07-07
本发明公开了一种醇脱氢酶突变体及其在生物无机胺化中的应用，所述醇脱氢酶突变体是将SEQ ID No.2所示的醇脱氢酶氨基酸序列中第73位、第107位、第175位、第96位或第286位进行单突变或多突变获得的。本发明提供的醇脱氢酶突变体能够高效地为氧化还原体系不断提供NADH，保证生物无机胺化过程中的高效辅酶供应，使无机胺化合成成本降低；本发明的醇脱氢酶突变体对NAD+的催化效率显著高于野生型，酶活提升2倍，将其用于辅酶再生系统与草铵膦脱氢酶偶联应用于草铵膦生产的时间被有效缩短，具有很好的应用前景。
📄 2022111096568
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2022-09-13
本发明公开了一种草铵膦脱氢酶突变体、基因工程菌及一锅法多酶同步定向进化方法。所述草铵膦脱氢酶突变体由来源于荧光假单胞菌的草铵膦脱氢酶第164位氨基酸由丙氨酸突变为甘氨酸所得，第205位精氨酸突变为赖氨酸，第332位苏氨酸突变为丙氨酸获得的所得，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。所述基因工程菌为将所述草铵膦脱氢酶突变体的基因导入宿主细胞。宿主细胞中还可以将葡萄糖脱氢酶的编码基因或甲酸脱氢酶的编码基因也导入，进行同步定向进化，使双基因过表达。本发明一锅法多酶同步定向进化方法可以筛选到活性大大提高的基因工程菌。本发明L‑PPT制备方法与转氨酶等催化工艺相比，工艺相对简单，原料转化率高，转化率可达100％，且立体选择性高。
📄 2020106149513
📂 C12N9_06
👤 浙江工业大学
📅 2020-06-30
本发明涉及一种L‑泛解酸内酯脱氢酶突变体、编码基因，含有编码基因的载体、基因工程菌，以及其在微生物催化制备酮基泛解酸内酯/D‑泛解酸内酯中的应用。所述L‑泛解酸内酯脱氢酶突变体，由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第156位、第224位、第164位进行单突变或多点联合突变获得。本发明构建的RhoLPLDH突变体菌株的比酶活较对照组提升显著，RhoLPLDH突变体与分子伴侣pGro7共表达进一步提高蓝了目的蛋白可溶性表达。本发明构建的RhoLPLDH突变体和pGro7共表达工程菌相较于出发菌株的比细胞活力也有显著提升。突变体特异性催化LPL，30小时底物转化率可达到94％，突变体在催化D,L‑PL底物时，48小时转化率可达到91.8％。突变体和共表达共轭聚酮还原酶和葡萄糖脱氢酶的工程菌采用“双菌一锅法”催化D,L‑PL拆分制备DPL时，DPL收率可达到92.7％。
📄 2023100889467
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2023-01-16
本发明公开了一种醇脱氢酶突变体及其在合成糠醇中的应用，所述的醇脱氢酶突变体氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示。YahK‑Y114W突变体提高了对辅酶NADH的偏好性使其催化糠醛的效率可达到野生型使用辅酶NADPH的水平。以表达突变体YahK‑Y114W的湿菌体为生物催化剂，以500mM糠醛作为底物，以500mM的葡萄糖做为辅底物，以葡萄糖脱氢酶为辅助酶，以NADH作为辅酶构建反应体系，在30℃、600rpm条件下反应6h，糠醇得率可达到76.04％，与野生型酶相比，得率提高了12.59％，成功改变醇脱氢酶对辅酶的偏好性，大幅度提高催化活力。
📄 2023111046031
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2023-08-30
本发明公开了一种类固醇脱氢酶突变体及其在制备甾体类药物中的应用，本发明通过筛选类固醇脱氢酶突变体提高酶活，由原来的54.3U/mg湿菌体提升至67.7U/mg湿菌体。本发明将类固醇脱氢酶突变体与过氧化氢酶通过连接肽连接构成融合蛋白后表达用于催化AD制备ADD，不仅提高了底物转化率，底物转化率高达98.6％，而且解决了反应过程中过氧化氢对湿菌体细胞的毒害问题，降低生产成本，具有良好的工业应用前景。
📄 2025100563688
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2025-01-14
本发明公开了一种热稳定性提高的羟基类固醇脱氢酶突变体、筛选方法及应用，本发明基于一株羟基类固醇脱氢酶结构预测和PROSS等计算机辅助设计技术迅速鉴定出与热稳定性相关的关键热点氨基酸残基，从而构建有限的定点突变体文库，进一步筛选获得优势突变体。所获得突变体的半失活温度(T5105)相对突变前提高了1.0‑7.7℃，其中突变体A126I和A132H的半失活温度(T5105)分别提高了7.7℃和3.7℃。且突变体的相对酶活达到突变前的99.86‑136.73％。本发明为快速提高酶的热稳定性提供了新方法，为羟基类固醇脱氢酶在工业中的应用奠定了基础。
📄 2025104382893
📂 C12N9_04
👤 浙江工业大学
📅 2025-04-09
本发明提供了一种脯氨酸脱氢酶、基因和突变体及其应用。该酶来源于Pseudomonas xantholysinigenes并在大肠杆菌中重组表达，构建质粒时对目的基因进行了密码子优化，优化后的DNA序列如SEQ ID NO.2所示。对该脯氨酸脱氢酶做了突变改造。该酶及其突变体可用于高效催化L‑脯氨酸降解从而完成对DL‑脯氨酸的生物拆分，得到高纯度的D‑脯氨酸，在D‑脯氨酸的绿色生产领域有很大的经济价值。
📄 2025102029888
📂 C12N9_06
👤 浙江工业大学
📅 2025-02-24
本发明公开了一种功能序列和结构模拟相结合的基因挖掘方法、NADH偏好型草铵膦脱氢酶突变体及应用。所述基因挖掘方法包括：(1)分析NADH型谷氨酸脱氢酶应具备的特性序列；(2)根据特征序列搜索基因库；(3)对搜索获得的基因进行聚类分析和蛋白结构模拟；(4)选择基因聚合度高且蛋白结构与已知草铵膦脱氢酶结构类似的基因作为候选基因。经基因挖掘得到来源于堆肥赖氨酸杆菌(Lysinibacillus composti)氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的野生型草铵膦脱氢酶，并经过突变筛选到NADH偏好型草铵膦脱氢酶突变体，突变位点选自以下一种：(1)A144G‑V375F‑M91A；(2)A144G‑V345A‑M91A；(3)A144G，该突变体酶能够利用廉价的辅酶NAD进行催化反应。
📄 2020116130208
📂 G16B20_50
👤 浙江工业大学
📅 2020-12-30
本发明公开了一种3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体、编码基因、载体及应用，属于酶工程技术领域。本发明的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体，由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体的第214位和/或第499位经定点突变获得。本发明通过多序列氨基酸比对，进行定点突变，提高了3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的催化效率，进一步提高了3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶产量。本发明构建的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶的重组大肠杆菌可将3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶酶活较出发菌株提高1.5倍，改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
📄 2021112636022
📂 C12N9_02
👤 浙江工业大学
📅 2021-10-28
柿子坊 · 知识产权运营
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