本发明公开了一种快速检测牛支原体的免疫胶体金试纸及其制备方法，所述试纸的底层为支撑板，该支撑板上依次黏附有紧密相连的样品垫、结合垫、NC膜和吸收垫，所述结合垫上吸附有胶体金标记的牛支原体P33单克隆抗体，NC膜上喷涂兔抗牛支原体P33多克隆抗体作为检测线和喷涂羊抗BALB/c小鼠IgG抗体作为质控线，检测线和质控线的线宽为1mm，检测线和质控线相距5mm，位于NC膜的中心，所述牛支原体P33蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该试纸可用于牛支原体抗原快速检测，5～10min出结果，敏感性达5ng/mL，具有样品用量少，无交叉反应，灵敏度高，能满足低成本、现场快速诊断的要求，大大提高了检测效率。将在牛支原体病的防控中发挥重要作用，具有潜在推广应用价值。
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