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本发明公开了一种电化学免疫传感器和制备方法以及电化学免疫分析方法和试剂盒。该电化学免疫传感器为：在打磨抛光的玻碳电极表面电沉积金纳米颗粒，并固载anti－cTnI1和anti－BNP1两种抗体。在ECL检测的过程中，将anti－cTnI2－AuNPs＠ABEI以及anti－BNP2－AuNPs＠g－C3N4两种二抗标记物同步装配到孵育过BNP和cTnI抗原的电化学免疫传感器表面上，随着夹心层cTnI和BNP浓度的升高，显示出随抗原浓度增加而增强的ECL信号，从而实现脑利钠肽(BNP)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的同步多重免疫分析，为急性心肌梗塞的诊断提供了一种有效的方案。

本发明公开了一种环境雌激素对家蚕发育毒性测试方法，包括以下步骤：首先是采用口腔灌胃注射含有一系列浓度的受试物于饥饿处理2h的5龄期家蚕幼虫；20min后对灌胃的家蚕解剖取组织器官。毒性终点包括家蚕中肠中谷胱甘肽还原酶活性系数、抗超氧阴离子自由基活力。通过染毒组与对照组的毒性终点比较，确定该受试物对家蚕发育的毒性。研究环境雌激素4‑壬基酚对家蚕幼虫期中肠发育的影响，以确定其对家蚕幼虫期发育毒性的剂量－效应关系。采用本发明技术方案，能对环境雌激素壬基酚产生多个生物效应终点，评价家蚕暴露在雌激素环境浓度水平下存在的潜在风险，是一种相对快速、简便、灵敏的检测方法。