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本发明公开了一种麦芽辅助果胶酶解提取枣汁的方法，该方法使用等外枣为原料，通过果胶酶解后，在使用不同粒度的麦芽粉辅助果胶酶的提汁，再通过在不同温度下挥发除去甲醇，最后得到枣汁。该方法以等外枣为原料通过合理安排酶解顺序，去除果胶酶枣汁提取过程中产生的大量甲醇，从而提高了等外枣的利用率，减少了果农损失。

本发明涉及一种新果胶酶的基因，所述基因为序列表中SEQ ID NO.1的核苷酸序列所示；或者是与SEQ ID NO.1所示核苷酸序列具有90％以上同源性且编码相同生物学功能蛋白质的序列；或者是能与SEQ ID NO.1所示核苷酸序列杂交且编码相同生物学功能蛋白质的序列。本发明如序列表中SEQ ID NO.1的核苷酸序列可以利用pET32载体和大肠杆菌表达菌株，实现了表达产物与增溶因子Trx融合，得到大量可溶形式的Trx‑果胶酶融合蛋白，并通过镍亲和层析和DEAE阴离子交换法纯化得到高纯度和高活性的重组果胶酶蛋白，为大量制备重组果胶酶提供基础。

本发明涉及一种重组果胶酶及其基因、重组载体、制备方法和应用，该基因至少含有下列核苷酸序列之一的DNA片：1)序列表中SEQ ID NO.1的核苷酸序列；2)与SEQ ID NO.1所示核苷酸序列具有90％以上同源性、且编码相同生物学功能蛋白质的核苷酸序列；或3)与SEQ ID NO.1所示核苷酸序列杂交且编码相同生物学功能蛋白质的核苷酸序列。按照本发明所述的基因序列进一步构建重组载体并转化酵母，可实现该重组果胶酶在高密度发酵条件下的组成型分泌表达，通过单纯的镍亲和纯化，即可得到纯度高于95％和蛋白浓度较高的活性蛋白，该活性蛋白在低温下具有很强的水解果胶活性，将为提高果汁的出汁率提供一种新型且高效的酶产品。

本发明涉及一种果胶酶人工序列及其表达方法和应用，该基因至少含有下列核苷酸序列之一的DNA片：1)序列表中SEQ ID NO.1的核苷酸序列；2)与SEQ ID NO.1所示核苷酸序列具有90％以上同源性、且编码相同生物学功能蛋白质的核苷酸序列；或3)与SEQ ID NO.1所示核苷酸序列杂交且编码相同生物学功能蛋白质的核苷酸序列。按照本发明所述的基因序列进一步构建重组载体并转化酵母，可实现该重组果胶酶在甲醇诱导下的分泌表达，通过DEAE阴离子交换纯化，可得到纯度高于95％活性重组果胶蛋白，该活性酶蛋白具有很强的澄清果汁的活性。

本发明涉及一种具有嗜冷（Cold-adapted）特性的内切型碱性果胶酶PelV307及其应用。所述果胶酶PelV307的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的果胶酶PelV307氨基酸序列与已知功能的果胶酶的相似度只有56%。本发明所述的果胶酶最适反应温度为30℃，在0℃和10℃下的酶活力分别能达到30℃活性下的33.4%和68.6%。本发明所述果胶酶为碱性果胶酶，最适反应pH为8.6，降解方式为内切，降解产物为二糖和三糖，具有良好的应用前景。