本发明公开了从乳酸合成纯聚乳酸的大肠杆菌工程菌及其制备方法和应用，大肠杆菌工程菌构建了由丙酰辅酶A转移酶突变体基因和聚羟基脂肪酸酯合成酶突变体基因融合表达构成的聚乳酸合成途径而获得。本发明并能够实现在生物体内以乙酰辅酶A为起始代谢物向聚乳酸的转化。本发明提供的突变体菌株内表达本发明提供的编码组成聚乳酸合成代谢途径中所有的酶的基因获得。本发明所构建的重组大肠杆菌菌株在兼性厌氧的条件下可利用含葡萄糖或甘油的丰富培养基为原料合成16％细胞干重。
📄 2021116809016
📂 C12N1_21
👤 淮阴工学院
📅 2021-12-31
本发明公开了一种重组酯酶、编码基因、工程菌及在生产R‑酮洛芬中的应用，所述重组酯酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明将含重组酯酶编码基因的工程菌经诱导发酵得到的湿菌体用缓冲液重悬后超声破碎提取的纯酶液为催化剂，以(R,S)‑酮洛芬乙酯为底物，以pH7.0‑9.0的缓冲溶液为反应介质构成反应体系，在20～60℃、120～240rpm条件下进行水解拆分反应，获得R‑酮洛芬，当底物浓度为1g/L时，30℃反应3h，得率为37.6％，产物的光学纯度为85.5％，手性选择性为R‑型。
📄 2022111623369
📂 C12N9_18
👤 浙江工业大学
📅 2022-09-23
本发明涉及一种7‑DHC出胞分泌合成的酿酒酵母基因工程菌株，及其构建方法和应用。本发明构建了一株可向胞外高效转运7‑DHC的重组S.cerevisiae菌株sc13，利用其进行500mL摇瓶双相发酵时，7‑DHC总产量达到28.189mg/g(分泌量11.701mg/g)，相较于对照sc1菌株，7‑DHC总产量提升14.54倍，胞外总分泌量提升13.77倍，其中胞外7‑DHC的分泌产量占比41.51％。由本发明构建的重组菌株具有更强的外分泌能力和更高的产量，对7‑DHC的合成以及简化7‑DHC的分离提取提供了指导思路，具有广阔的应用前景。
📄 2023100585156
📂 C12N1_19
👤 浙江工业大学
📅 2023-01-18
本发明公开了一种腈水解酶突变体、工程菌及其在合成(R)‑3‑氰基己酸中的应用，所述腈水解酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第135位、第199位、第59位进行单突变或多突变获得的。本发明通过定向进化技术提升腈水解酶活性及立体选择性构建了腈水解酶突变体，与亲本腈水解酶PgNITmut相比，突变体PgNITmut/F135L对底物3‑氰基己腈的对映体选择率(E值)由332提升至419；突变体PgNITmut/F135L/R199W活力提升1.36倍，E值提升至461；突变体PgNITmut/F135L/R199W/T59D活力提升2.05倍，E值提升至569。本发明腈水解酶突变体具有较高的活性及立体选择性，利用高效腈水解酶法合成布瓦西坦手性中间体(R)‑3‑氰基己酸，大幅度降低工业化生产成本，在布瓦西坦工业化生产中具有良好的应用前景。
📄 2023102021266
📂 C12N9_78
👤 浙江工业大学
📅 2023-02-23
本发明涉及一种草铵膦脱氢酶突变体及其编码基因，以及利用该突变体构建的基因工程菌菌及其在催化PPO制备L‑草铵膦中的应用。所述突变体氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，编码基因如SEQ ID No.2所示。本发明构建的基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pETDuet‑1‑PPTGDHE3(A164G‑V354A‑R205K)‑GDH，具有高产草铵膦脱氢酶的性质，用于发酵罐生产，最高酶活力可达6605U/L，可用于微生物催化PPO制备L‑草铵膦，大大节约了成本，具有十分重要的产业价值和显著的社会效益；含草铵膦脱氢酶的固定化全细胞用于催化PPO生产L‑草铵膦，重复使用20次后，固定化细胞仍能保持100％的转化率，具有良好的工业化应用前景。
📄 2021110220135
📂 C12N9_06
👤 浙江工业大学
📅 2021-09-01
一种耐油酿酒酵母基因工程菌及其构建方法，属于生物工程技术领域。本发明公开了一株过表达Are2和Yft2基因的同时替换SEI1及Tgl1基因的酿酒酵母基因工程菌，所述酿酒酵母由原始酿酒酵母利用同源重组技术替换基因后改造而成。由于原始菌株BY4741自身存储甾醇类物质的量有限，并且过量积累的脂质中间体会产生产物抑制作用，不仅直接影响目标产物的合成，而且会引发细胞毒性，降低细胞活力。改造后的耐油酿酒酵母基因工程菌较原始出发菌株显著提升了细胞油脂存储单元脂滴结构的体积占比，有效地降低了脂质累积引起的细胞毒性和产物抑制，显著提升了酯类化合物的胞内累积量，为突破酯类类化合物酿酒酵母从头合成极限提供了新的策略以及良好的耐受细胞模型。
📄 2021113252655
📂 C12N1_19
👤 浙江工业大学
📅 2021-11-10
本发明公开了一种普鲁兰酶突变体、工程菌及其应用，所述普鲁兰酶突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第365位、第401位、第504位或第499位氨基酸进行单突变或多突变获得的。本发明构建的普鲁兰酶突变体的催化活性、热稳定性与耐酸稳定性均得到了提高，其中突变体PulAR‑A365V‑401C‑H499A‑T504V的催化效率较野生型普鲁兰酶PulAR在pH5.0、6.0，60℃条件下分别提高了6.6倍与9.6倍；在60℃，65℃的半衰期分别比野生型普鲁兰酶提高了2.6和3.1倍，且在pH 4.5与pH 5.0的半衰期分别比野生型普鲁兰酶提高了1.6和1.8倍。
📄 2022102726722
📂 C12N9_44
👤 浙江工业大学
📅 2022-03-18
本发明公开了一种醛酮还原酶基因重组共表达载体、工程菌及其应用，所述重组共表达载体以质粒pET‑28b、质粒pETDuet‑1或质粒pCDFDuet‑1为基础，包含核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示醛酮还原酶突变体基因和核苷酸序列为SEQ ID NO：3所示葡萄糖脱氢酶基因。本发明方法在双酶分开单独表达后组合催化方法的最大底物投料量50g/L(已在专利申请(201610124451.5)中公开)的基础上进一步提高到60g/L以上，同时双酶共表达体系有利于全细胞固定化，更具工业化应用前景。
📄 2017100499973
📂 C12N15_53
👤 浙江工业大学
📅 2017-01-21
本发明公开了一种高产红没药烯的酿酒酵母工程菌及应用，所述酿酒酵母工程菌按如下方法构建：在增强甘油代谢途径的酿酒酵母菌中，转入红没药烯合成酶基因Agbis，同时敲除葡萄糖阻遏转录因子MIG1，构建得到高产红没药烯的酵母工程菌。本发明在酵母工程菌中采用增强甘油利用途径和敲除葡萄糖阻遏转录因子MIG1的组合策略，使得红没药烯摇瓶产量最终提高了91.1％，达到868.6mg/L，为目前报道的甘油蔗糖合成最小培养基摇瓶发酵最高产量。
📄 202110088156X
📂 C12N1_19
👤 浙江工业大学
📅 2021-01-22
本发明涉及一种羧酯酶及其编码基因，以及由该编码基因构建的基因工程，以及其在微生物催化制备S‑萘普生中的应用。所述羧酯酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因核苷酸核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。利用该基因构建工程菌进行酶法立体选择性催化生产S‑萘普生，具有时空产率高，效果稳定的特点，在较短时间内可以获得转化效率可达到48%以上，光学纯度可达到99%以上，对实现高产量高纯度的S‑萘普生生产具有重要意义。
📄 2022102030754
📂 C12N9_18
👤 浙江工业大学
📅 2022-03-03
本发明一种L‑半胱氨酸的基因工程菌及构建方法，以及该基因工程菌在微生物发酵制备L‑半胱氨酸中的应用。本发明通过(1)强化大肠杆菌L‑半胱氨酸合成途径的丝氨酸模块，增强大肠杆菌对丝氨酸的利用能力，(2)减弱丝氨酸的转运，减弱副产物对L‑半胱氨酸合成的影响，(3)增加硫模块合成基因的表达(4)质粒上异源表达Corynebacterium glutamicum的serC基因，得到L‑半胱氨酸高产的大肠杆菌基因工程菌株，L‑半胱氨酸产量从2.7g/L提高到3.83g/L。
📄 2019114092389
📂 C12N1_21
👤 浙江工业大学
📅 2019-12-31
本发明公开了一种草铵膦脱氢酶突变体、基因工程菌及一锅法多酶同步定向进化方法。所述草铵膦脱氢酶突变体由来源于荧光假单胞菌的草铵膦脱氢酶第164位氨基酸由丙氨酸突变为甘氨酸所得，第205位精氨酸突变为赖氨酸，第332位苏氨酸突变为丙氨酸获得的所得，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。所述基因工程菌为将所述草铵膦脱氢酶突变体的基因导入宿主细胞。宿主细胞中还可以将葡萄糖脱氢酶的编码基因或甲酸脱氢酶的编码基因也导入，进行同步定向进化，使双基因过表达。本发明一锅法多酶同步定向进化方法可以筛选到活性大大提高的基因工程菌。本发明L‑PPT制备方法与转氨酶等催化工艺相比，工艺相对简单，原料转化率高，转化率可达100％，且立体选择性高。
📄 2020106149513
📂 C12N9_06
👤 浙江工业大学
📅 2020-06-30
柿子坊 · 知识产权运营
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