摘要
本发明公开了一种生物多酶偶联法氧化还原不对称制备L‑草铵膦的方法,以D,L‑草铵膦为原料,经酶催化体系催化获得L‑草铵膦,所述酶催化体系包括用于将D,L‑草铵膦中的D‑草铵膦催化为2‑羰基‑4‑[羟基(甲基)膦酰基]丁酸的D‑氨基酸氧化酶突变体、以及用于将2‑羰基‑4‑[羟基(甲基)膦酰基]丁酸催化还原为L‑草铵膦的转氨酶,所述D‑氨基酸氧化酶突变体由野生菌Rhodotorula taiwanensis中的D‑氨基酸氧化酶突变所得,突变位点选自以下四种中的一种:(1)M213S;(2)M213S‑N54V‑F58E;(3)M213S‑N54V‑F58E‑D207A;(4)M213S‑N54V‑F58E‑D207A‑S60T。本发明D‑氨基酸氧化酶突变体具有更好的催化效率,以外消旋D,L‑草铵膦为底物进行催化反应时,转化率远高于野生型酶,PPO产率也大幅提升。