本发明涉及一种7‑DHC出胞分泌合成的酿酒酵母基因工程菌株，及其构建方法和应用。本发明构建了一株可向胞外高效转运7‑DHC的重组S.cerevisiae菌株sc13，利用其进行500mL摇瓶双相发酵时，7‑DHC总产量达到28.189mg/g(分泌量11.701mg/g)，相较于对照sc1菌株，7‑DHC总产量提升14.54倍，胞外总分泌量提升13.77倍，其中胞外7‑DHC的分泌产量占比41.51％。由本发明构建的重组菌株具有更强的外分泌能力和更高的产量，对7‑DHC的合成以及简化7‑DHC的分离提取提供了指导思路，具有广阔的应用前景。
📄 2023100585156
📂 C12N1_19
👤 浙江工业大学
📅 2023-01-18
本发明涉及一种草铵膦脱氢酶突变体及其编码基因，以及利用该突变体构建的基因工程菌菌及其在催化PPO制备L‑草铵膦中的应用。所述突变体氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，编码基因如SEQ ID No.2所示。本发明构建的基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pETDuet‑1‑PPTGDHE3(A164G‑V354A‑R205K)‑GDH，具有高产草铵膦脱氢酶的性质，用于发酵罐生产，最高酶活力可达6605U/L，可用于微生物催化PPO制备L‑草铵膦，大大节约了成本，具有十分重要的产业价值和显著的社会效益；含草铵膦脱氢酶的固定化全细胞用于催化PPO生产L‑草铵膦，重复使用20次后，固定化细胞仍能保持100％的转化率，具有良好的工业化应用前景。
📄 2021110220135
📂 C12N9_06
👤 浙江工业大学
📅 2021-09-01
一种耐油酿酒酵母基因工程菌及其构建方法，属于生物工程技术领域。本发明公开了一株过表达Are2和Yft2基因的同时替换SEI1及Tgl1基因的酿酒酵母基因工程菌，所述酿酒酵母由原始酿酒酵母利用同源重组技术替换基因后改造而成。由于原始菌株BY4741自身存储甾醇类物质的量有限，并且过量积累的脂质中间体会产生产物抑制作用，不仅直接影响目标产物的合成，而且会引发细胞毒性，降低细胞活力。改造后的耐油酿酒酵母基因工程菌较原始出发菌株显著提升了细胞油脂存储单元脂滴结构的体积占比，有效地降低了脂质累积引起的细胞毒性和产物抑制，显著提升了酯类化合物的胞内累积量，为突破酯类类化合物酿酒酵母从头合成极限提供了新的策略以及良好的耐受细胞模型。
📄 2021113252655
📂 C12N1_19
👤 浙江工业大学
📅 2021-11-10
本发明涉及一种羧酯酶及其编码基因，以及由该编码基因构建的基因工程，以及其在微生物催化制备S‑萘普生中的应用。所述羧酯酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因核苷酸核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。利用该基因构建工程菌进行酶法立体选择性催化生产S‑萘普生，具有时空产率高，效果稳定的特点，在较短时间内可以获得转化效率可达到48%以上，光学纯度可达到99%以上，对实现高产量高纯度的S‑萘普生生产具有重要意义。
📄 2022102030754
📂 C12N9_18
👤 浙江工业大学
📅 2022-03-03
本发明一种L‑半胱氨酸的基因工程菌及构建方法，以及该基因工程菌在微生物发酵制备L‑半胱氨酸中的应用。本发明通过(1)强化大肠杆菌L‑半胱氨酸合成途径的丝氨酸模块，增强大肠杆菌对丝氨酸的利用能力，(2)减弱丝氨酸的转运，减弱副产物对L‑半胱氨酸合成的影响，(3)增加硫模块合成基因的表达(4)质粒上异源表达Corynebacterium glutamicum的serC基因，得到L‑半胱氨酸高产的大肠杆菌基因工程菌株，L‑半胱氨酸产量从2.7g/L提高到3.83g/L。
📄 2019114092389
📂 C12N1_21
👤 浙江工业大学
📅 2019-12-31
本发明公开了一种草铵膦脱氢酶突变体、基因工程菌及一锅法多酶同步定向进化方法。所述草铵膦脱氢酶突变体由来源于荧光假单胞菌的草铵膦脱氢酶第164位氨基酸由丙氨酸突变为甘氨酸所得，第205位精氨酸突变为赖氨酸，第332位苏氨酸突变为丙氨酸获得的所得，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。所述基因工程菌为将所述草铵膦脱氢酶突变体的基因导入宿主细胞。宿主细胞中还可以将葡萄糖脱氢酶的编码基因或甲酸脱氢酶的编码基因也导入，进行同步定向进化，使双基因过表达。本发明一锅法多酶同步定向进化方法可以筛选到活性大大提高的基因工程菌。本发明L‑PPT制备方法与转氨酶等催化工艺相比，工艺相对简单，原料转化率高，转化率可达100％，且立体选择性高。
📄 2020106149513
📂 C12N9_06
👤 浙江工业大学
📅 2020-06-30
本发明涉及一种无诱导剂添加高产D‑泛酸的基因工程菌、构建方法及应用。本发明主要通过精细下调支链氨基酸代谢途径的关键基因ilvE、leuA，使工程菌在满足自身生长需求的同时解除支链氨基酸合成对D‑泛酸合成的抑制作用；敲除lacI基因使得工程菌在生产过程中不需要添加诱导剂IPTG，得到一株无诱导剂IPTG添加用于高产D‑泛酸的工程菌株，并对发酵培养基的组分、发酵工艺进行了优化，最终使得D‑泛酸摇瓶效价达到7.23 g/L；运用5‑L发酵罐发酵48~60小时，D‑泛酸产量能够达到90~105 g/L，发酵周期较出发菌株缩短35%~48%，发酵过程中无需添加诱导剂IPTG及其他氨基酸，减少了发酵步骤。
📄 2025103157262
📂 C12N15_70
👤 浙江工业大学
📅 2025-03-18
本发明涉及一种醛缩酶基因salA及其在构建高产ADD基因工程菌中的应用，以及高产ADD的分枝杆菌基因工程菌及其构建与其在微生物发酵制备1,4‑雄二烯‑3,17‑二酮中的应用。所述高产ADD的分枝杆菌基因工程菌是以分枝杆菌为底盘菌，依次敲除kshA1、MnOpccR、salA基因获得。本发明所提供的基因工程菌株有效地控制了副产物的生成，大大提高甾体底物的利用率和产物的摩尔转化率，简化了后处理的过程，该策略还可以应用在同类型的新金色分枝杆菌进行植物甾醇为底物，微生物转化侧链降解合成AD和9‑OH‑AD等共性合成路径的产物合成，完全阻断4‑HBC，1，4‑HBC副产物合成，在提升底物植物甾醇的利用率的同时抑制副产物累积减少下游分离的负担，具有一定的普适性，适合于大力推广应用，具有较高的经济效益和社会效益。
📄 2022114139508
📂 C12N15_60
👤 浙江工业大学
📅 2022-11-11
本发明公开了一种产D‑泛酸的基因工程菌及应用，所述基因工程菌通过以下步骤构建获得：(1)以保藏号为CCTCC NO：M2018914的大肠杆菌为出发菌株，敲除aceF和mdh两个基因，获得菌株DPA02；(2)将来源于谷氨酸棒状杆菌的panB与panC基因，以及ppnk基因在菌株DPA02中过表达获得产D‑泛酸的基因工程菌。本发明产D‑泛酸的基因工程菌的D‑泛酸的产量在摇瓶发酵中提高至6.89g/L，提高了80％；同时，利用20％溶氧反馈补料结合甜菜碱添加的分批补料发酵策略使5L发酵罐中D‑泛酸积累量提高至68.3g/L，糖酸转化率达到0.36g/L。
📄 2021107275768
📂 C12N1_21
👤 浙江工业大学
📅 2021-06-29
本发明具体涉及一种从头合成7‑DHC酿酒酵母基因工程菌及其构建方法与应用，属于生物技术领域。本发明以酿酒酵母工程菌SC9为出发菌株，以TY转座子多次、多拷贝tHMG1、DHCR24、ERG1，以TY转座子多拷贝ERG2、POS5、ERG7、ERG11、IDI1、ERG3，以及在基因组上单拷贝POS5、ERG3、DHCR24，提高胞内还原性辅酶Ⅱ含量及加强7‑DHC合成主路径。基因组单拷贝ACL、ACS1、ERG10、ERG19等以加强酿酒酵母乙醇的利用及动态调控7‑DHC的合成。由本发明构建的酿酒酵母基因工程菌株具有较高的产物累积，为替代传统多步化学合成路线，实现工业化生产奠定基础。
📄 2024118761392
📂 C12N1_19
👤 浙江工业大学
📅 2024-12-19
本发明公开一种高产D‑泛酸的基因工程菌及其应用，本发明通过回补底盘菌DPA11已经敲除的ilvA基因，利用起始密码子TTG替换ilvE的起始密码子GTG，利用Trc启动子替换serA、glyA、ilvB、ilvN、pntA、pntB和cyo的原始启动子，再在质粒上异源过表达来源于谷氨酸棒状杆菌的panB和panC，得到D‑泛酸高产的大肠杆菌基因工程菌株，该菌株在摇瓶水平上D‑泛酸的产量达到了6.81g/L，是原始出发菌株的3.83倍，并且避免了外源添加异亮氨酸，节约成本，同时发酵罐放大培养节约大量的时间成本。
📄 2021112954646
📂 C12N1_21
👤 浙江工业大学
📅 2021-11-03
本发明涉及一种高产D‑泛酸的基因工程菌、构建方法，及其在微生物发酵制备D‑泛酸中的应用。本发明通过对大肠杆菌的有机酸合成途径相关基因进行了阻断，减少有机酸的副作用及增加丙酮酸池的积累，加强丙酮酸合成途径基因pykA，加强丙酮酸积累，解除关键酶的负反馈抑制，解决D‑泛酸合成的瓶颈步骤，改善糖摄取能力，增加了前体丙酮酸的积累，过表达基因lpd、ilvD改善主路合成途径基因的表达情况，最终获得更高产D‑泛酸工程菌，无需质粒引入外源酶增强关键酶酶活，摇瓶发酵产量达到3.99g/L；敲除阻遏蛋白编码基因lacI后形成组成型表达，并进行培养基优化后，摇瓶发酵产量达到4.72g/L；在5L发酵罐中分批补料发酵，产量达到34.28g/L。
📄 2021105120090
📂 C12N1_21
👤 浙江工业大学
📅 2021-05-11
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