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本发明公开了一种米曲霉脂肪酶突变体及在拆分(R,S)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸酯制备(R)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸酯中的应用，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第38位或第230位进行定点饱和单突变或多突变获得的。本发明通过比较突变体酶AOL‑3F38N、AOL‑3F38N‑V230R和未突变酶AOL‑3的水解能力，结果发现突变体酶AOL‑3F38N、AOL‑3F38N‑V230R的水解活性是未突变脂肪酶的3.4倍和4.0倍，改造后的脂肪酶的热稳定性在50℃以后表现的更好，(R)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸酯产率提高，更加适合工业化生产。

本发明公开了一种印迹脂肪酶及其合成蔗糖‑6‑乙酯的应用，所述印迹脂肪酶按如下方法制备：向脂肪酶酶液中，加入脂肪酸、糖醇，搅拌使其混合均匀，调节混合酶液pH为6.5‑8.5，在20‑30℃恒温下，以120‑160转/分钟的速度搅拌10‑25分钟后，立刻加入大孔树脂，在25‑35℃恒温、60‑100转/分钟下搅拌吸附3‑6h，过滤，获得滤液和滤饼；滤饼用蒸馏水洗涤后，真空干燥，获得印迹脂肪酶；本发明以糖醇辅助，10‑18碳链脂肪酸为印迹分子在水相中印迹脂肪酶，明显提高了印迹酶在有机溶剂中催化酯化的性能，蔗糖酯化率可以提高10％左右，蔗糖酯的六位酯化率可以提高近10％。

本发明公开了一种催化性能提高的脂肪酶及其应用，具体公开了一种最适反应温度、活性和热稳定性提高的脂肪酶及其应用，属于基因工程技术领域。本发明提供一种热稳定性提高的脂肪酶CALB突变体A146G‑L278M和A146G‑L278M‑A151P的基因及酯合成应用。本发明在野生型脂肪酶基因序列的基础上，进行理性设计选择合适的突变位点，最终获得了Tm值分别提高了3.3℃和4.2℃、最适反应温度提高5℃且催化效率提高了4.1倍的突变体。

本发明公开了一种新型脂肪酶AjLip970及其应用，所述脂肪酶AjLip970的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述脂肪酶AjLip970具有催化油脂降解的功能；编码所述脂肪酶AjLip970的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。并且本发明构建了含有AjLip970基因的重组载体pET22b‑AjLip970，将其在原核宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3)中表达，实验证明，所述基因在原核宿主细胞中表达后，获得的纯化脂肪酶具有高效催化酯类底物水解的活性，在餐厨废油的无害化处理和资源化利用领域具有巨大的应用潜力。