本发明涉及生物技术领域，具体涉及靶向敲除ATG5基因的gRNA引物、表达系统、细胞株。本发明确定靶向ATG5基因的gRNA引物，第一靶点序列T1序列为AGTGGATAATCTTTATGGCATGG；第二靶点序列T2序列为TCATGACAACATGCTGACAGTGG。本发明构建的ATG5基因敲除的人血管内皮细胞株的总蛋白，检测自噬效应蛋白LC3‑Ⅰ/LC3‑Ⅱ、p62和Beclin‑1，结果显示自噬效应蛋白的表达增强，表明本发明构建的细胞株成功敲除ATG5基因，沉默ATG5基因的表达，能够应用于ATG5基因在引起内皮细胞向间充质的转化和凋亡的作用机制。
📄 2021104797821
📂 C12N15_113
👤 新乡医学院
📅 2021-04-30
本发明涉及一种通过CRISPR/Cas9系统快速获得大片段缺失的细胞系基因敲除方法，属于基因工程和遗传修饰领域。本发明改造pX458载体，使其带有DsRed2和ECFP，然后针对目标基因设计多个特异性的sgRNA位点，将其连接至改造载体中，转染细胞系后利用流式细胞仪对细胞群进行分选，可以非常快速获得基因组被编辑的单细胞，然后用PCR扩增单细胞DNA序列，通过凝胶电泳即可以从中挑选出具有大片段缺失的单细胞。本发明通过将CRISPR/Cas9系统、流式细胞仪单细胞分选和表达载体上的荧光蛋白筛选三者结合起来，可以在短时间内获得具有大片段缺失的阳性单克隆，极大地提高细胞系基因敲除工作效率。
📄 2017106334673
📂 C12N15_85
👤 新乡医学院
📅 2017-07-28
本发明涉及一种细胞系中食管癌功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法，属于分子生物学技术领域。本发明中的细胞系中食管癌功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法，利用流式细胞分选仪，将200个带有载体荧光标签的阳性细胞群分选到96孔板的两个孔中，培养0h后进行片段分析（Fragment analysis，FA），可检测到CRISPR‑Cas9打靶该功能基因后目的基因座发生有效编辑的克隆；培养7天后，再次进行片段分析，此时片段分析峰图可根据不同细胞的增殖特性发生变化，其中增殖速度快的细胞出峰显著，而增殖速度慢的细胞群则出峰不明显，甚至不出峰；由此可快速判断食管癌功能基因敲除后的增殖表型。
📄 2018113942377
📂 C12N15_90
👤 新乡医学院
📅 2018-11-21
本发明公开了一种鼠抗人CD61单克隆抗体杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其制备方法和应用、流式检测试剂，属于生物工程技术领域。本发明以人外周血白细胞为免疫原免疫Balb/c小鼠，采用细胞融合技术，利用免疫细胞化学和流式间接免疫荧光法筛选杂交瘤细胞，应用免疫沉淀‑质谱法对单克隆杂交瘤细胞产生的抗体进行特异性鉴定，经Western Blot验证，获得一株能稳定分泌鼠抗人CD61单克隆抗体的杂交瘤细胞株ⅡD5G8，保藏编号为CGMCC No.13300。采用动物体内诱生法制备单抗，鉴定抗体重链为IgG1，轻链为kappa型，抗体纯化后经FITC标记可用于流式直标免疫荧光检测人外周血血小板CD61抗原表达。
📄 2017102296920
📂 C12N5_20
👤 河南中医药大学
📅 2017-04-10
本申请属于细胞工程技术领域，具体公开了一种永生化的奶牛胎盘滋养层细胞系，其以奶牛胎盘滋养层细胞作为宿主细胞，转染pCI‑neo‑hTERT真核表达载体，经过G418筛选得到。本申请至少具有以下有益效果之一：本申请提供的奶牛胎盘滋养层细胞系以奶牛胎盘滋养层细胞作为宿主细胞，转染pCI‑neo‑hTERT真核表达载体，经过G418筛选得到的，其含有端粒酶，该细胞均一性好、稳定性强且培养方便。
📄 2021102972169
📂 C12N5_10
👤 北京农学院
📅 2021-03-19
本发明公开了一种在NCI‑H460细胞系中对CK2起到抑制作用的多肽，属于生物制药技术领域，包括如SEQ ID NO.1所示的抑制多肽的氨基酸序列；还包括一种在NCI‑H460细胞系中对CK2起到抑制作用的多肽的制备方法，包括以下步骤：S1.将Fmoc‑Wang amide‑MBHA Resin树脂预处理后脱除Fmoc保护基；S2.将Fmoc‑Cys(R1)‑OH偶联于脱保护后的树脂以及末端Arg羧基羟基的甲基化；S3.从C‑端到N‑端重复上述S1‑S2以连接上相应的氨基酸，得到多肽‑树脂复合物；S4.N端Pro磷酸酯衍生物的制备以及与多肽‑树脂复合物的偶联；S5.将固相合成得到的多肽‑树脂复合物裂解，释放出合成的抑制多肽。解决了肿瘤细胞的异常增殖和扩散问题，具有有效地拮抗CK2的催化活性的优势。
📄 2024105679328
📂 C07K14_00
👤 永州中古生物技术有限公司
📅 2024-05-09
本发明公开了一种稳定表达猪圆环病毒2型ORF3蛋白细胞株的构建及应用,属于生物技术检测领域。构建方法包括以下步骤:(1)在pLVZG‑CMV‑copGFP‑Puro载体的NheI和BamHI多克隆位点插入PCV2 ORF3基因;(2)用构建好的pLVZG‑CMV‑ORF3‑copGFP‑Puro重组质粒与病毒包装质粒共转染293T细胞,培养、出毒、收取病毒上清、过滤得重组慢病毒液;(3)将包装好的重组慢病毒感染PK‑15细胞,通过嘌呤霉素筛选及鉴定,得稳定表达PCV2 ORF3蛋白细胞株。本发明利用重组慢病毒系统制备一种融合标签蛋白并能稳定表达PCV2 ORF3蛋白的细胞株,该细胞株为研究PCV2致病机理研究提供平台,有利于猪圆环病毒2型的深层次的致病机制研究。
📄 2021105649193
📂 C12N15_867
👤 龙岩学院
📅 2021-05-24
本发明涉及一种杂交瘤细胞株7G11及其抗体，杂交瘤细胞株7G11于2016年12月27日送中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO:C201703，该杂交瘤细胞株7G11能够产生抗细交链格孢菌酮酸的单克隆抗体，能够特异性检测细交链格孢菌酮酸，对细交链格孢菌酮酸检测具有重要意义。
📄 2017100291621
📂 C12N5_20
👤 西南大学
📅 2017-01-16
本发明涉及一种杂交瘤细胞株4F4及其抗体，杂交瘤细胞株4F4于2016年12月27日送中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO:C201702，该杂交瘤细胞株4F4能够产生抗细交链格孢菌酮酸的单克隆抗体，能够特异性检测细交链格孢菌酮酸，对细交链格孢菌酮酸检测具有重要意义。
📄 2017100288760
📂 C12N5_20
👤 西南大学
📅 2017-01-16
一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株能够分泌与乙肝表面抗原特异性结合的乙肝表面抗原单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株保藏号为CGMCC No.17681、CGMCC No.17682。杂交瘤细胞株制备方法，包括如下步骤：免疫、测定血清效价、融合、细胞株筛选。上述杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生的乙肝表面抗原单克隆抗体及制备方法，其制备方法包括如下步骤：腹水生产；腹水过滤；腹水稀释；测OD后上样；平衡；洗脱并接样；吸光值上扬后换管接样；加入NaN3；跑电泳、测活性；进行胶体金筛选。本发明提供的杂交瘤细胞株的制备方法获得的乙肝表面抗原单克隆抗体，产量高、稳定性好，成本低，胶体金检测应用中可提高检测灵敏度，快速准确检测大量临床样本。
📄 2019104292139
📂 C12N15_06
👤 青岛汉德森生物科技有限公司
📅 2019-05-22
本发明公开了抗HPV16E7蛋白单抗79A11、杂交瘤细胞株及其制备方法和应用，该杂交瘤细胞保存于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：C201718，该杂交瘤细胞能够分泌效价高的单克隆抗体，获得抗体能够与HPV16阳性的细胞株CaSki和HPV16阳性宫颈癌鳞癌石蜡组织切片反应，具有很好的特异性；可以作为ELISA试剂盒、免疫化学试剂盒、免疫荧光试剂盒、化学发光试剂盒、Western blot的检测试剂盒、免疫层析试纸、电化学试剂盒或磁珠试剂盒等。
📄 2020101799322
📂 C07K16_08
👤 重庆晨屿科技有限公司
📅 2020-03-16
本发明公开了抗HPV16E7蛋白单抗69E2、杂交瘤细胞株及其制备方法和应用，该杂交瘤细胞保存于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：C2019181，该杂交瘤细胞能够分泌效价高的单克隆抗体，获得抗体能够与HPV16阳性的细胞株CaSki和HPV16阳性宫颈癌鳞癌石蜡组织切片反应，具有很好的特异性；可以作为ELISA试剂盒、免疫化学试剂盒、免疫荧光试剂盒、化学发光免疫分析检测试剂盒等的检测试剂。
📄 2020101800438
📂 C07K16_08
👤 重庆理工大学
📅 2020-03-16
柿子坊 · 知识产权运营
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