基于CRISPR/Cas9多基因敲除低转染效率细胞系的方法

摘     要：本发明公开了一种基于慢病毒表达CRISPR/Cas9高效敲除低转染率细胞的方法。该方法涉及两种慢病毒，一种是表达sgRNA及Cas9的慢病毒，另一种是表达Cre蛋白的慢病毒。将多基因的sgRNA及Cas9同时克隆至慢病毒载体的两个同向loxp之间，在低转染效率的细胞内实现多基因同时敲除，再利用表达Cre的慢病毒，对基因组中整合的Cas9及sgRNA进行有效去除，防止过度表达Cas9及sgRNA造成脱靶效应。本发明结合了慢病毒具备的能够高效感染分裂与非分裂细胞以及loxp‑Cre系统高效去除反应的特点，该系统具有毒性小、基因敲除效率高、准确性高，周期短等特点，对于在低转染效率的细胞系中实现多基因敲除意义重大。

著 录 项： 

• 1． 买家选定所需专利，确认国家手续办理方，下单，确认交易合同；
  2． 卖家确认专利可交易；
  3． 买家支付交易款项到平台；
  4． 买卖双方签订《专利转让委托书》、《转让协议》、《解除代理委托书》各一式两份并提交给办理国家手续方；
  5． 办理国家手续方提交办理官方手续，国家知识产权局1个月左右下发《著录项目变更手续合格通知书》；
  6． 买家确认收到《专利证书》、《著录项目变更手续合格通知书》；
  7． 平台把交易款项支付给卖家，至此专利转让合同完成。
  

• 交易方	企业	个人
  买家	营业执照副本复印件（需盖公章）	身份证复印件（签字）
  	专利转让委托书（需盖公章）一式两份	专利转让委托书（需签字）一式两份
  	专利转让协议（需盖公章）一式两份	专利转让协议（需签字）一式两份
  卖家	营业执照副本复印件（需盖公章）	身份证复印件（需申请人签字）
  	解除代理委托书（需盖公章）一式两份（如专利通过代理机构申请）	解除代理委托书（需签字）一式两份（如专利通过代理机构申请）
  	专利转让协议（需盖公章）一式两份	专利转让协议（需签字）一式两份
  	专利请求书或手续合格通知书、授权通知书复印件	专利请求书或手续合格通知书、专利授权通知书复印件
  	专利证原件（若授权下证）	专利证原件（若授权下证）

• 日期	法律信息	备注
  2021/02/05	授权
  2017/10/10	实质审查的生效	IPC(主分类): C12N 15/867 专利申请号: 201710153605.8 申请日: 2017.03.15
  2017/09/12	公开